Verbessern Sie Ihre Daten mit guten Pipettierpraktiken

Flüssigkeiten mit hohem Dampfdruck können schnelle Konzentrationsverschiebungen verursachen, wenn sie zu lange der Luft ausgesetzt sind. Befeuchten Sie die Spitze vor, arbeiten Sie schnell und halten Sie die Behälter nach Möglichkeit verschlossen. Eine konsistente Aspirationstechnik, einschließlich der Option des Rückwärtspipettierens, kann zur Stabilisierung des Volumens beitragen.

Da Verdrängerpipetten keinen Luftspalt haben, sind sie bei Flüssigkeiten mit hohem Dampfdruck genauer. Daher werden sie empfohlen, wenn die Genauigkeit für die Anwendung entscheidend ist. 

Bei der Auswahl der richtigen Pipette müssen Sie Ihre Anforderungen bewerten. Erstens, welche Art von Proben pipettieren Sie? Sind sie wässrig? Oder sind sie viskos, flüchtig, schäumend, korrosiv oder gefährlich? Für wässrige und nahezu wässrige Flüssigkeiten sind die gebräuchlichsten Luftverdrängungspipetten (auch "Luftkissen"-Pipetten genannt) eine gute Wahl. Für viskose, flüchtige und andere ungewöhnliche Flüssigkeitstypen wäre eine Direktverdrängerpipette sowohl aus Gründen der Genauigkeit als auch der Sicherheit die bessere Wahl. 

Welches Volumen werden Sie pipettieren? Wie viele Proben müssen Sie von einem Gefäß auf ein anderes umfüllen? Lesen Sie dieses Whitepaper zur Pipettenauswahl , um zu verstehen, welche Pipette je nach Flüssigkeit und anderen Faktoren, die für Ihre Situation spezifisch sind, am besten funktioniert.

Mikrofluidische Assays erfordern kompromisslose Genauigkeit. Stabilisieren Sie Ihre Pipettierhand, verwenden Sie hochwertige Spitzen, die für extrem geringe Volumina ausgelegt sind, und ziehen Sie das Rückwärtspipettieren in Betracht, um die Konsistenz zu verbessern. Eine regelmäßige Kalibrierung sowie die Kontrolle von Umweltfaktoren wie der Temperatur unterstützen die Genauigkeit auf diesen Skalen. 

Rainin-Pipetten, gepaart mit fein entwickelten Mikrovolumenspitzen, bieten die präzise und zuverlässige Steuerung, die Sie benötigen, um in hochmodernen mikrofluidischen Experimenten hervorragende Ergebnisse zu erzielen.

Beim Pipettieren dickflüssiger Lösungen mit einer Mehrkanalpipette führen Luftblasen zu Volumenfehlern und erschweren die Messungen. Um das Risiko von Blasenbildung zu verringern, befeuchten Sie die Spitzen vor, indem Sie sie 2-3 Mal langsam ansaugen und abgeben. Saugen Sie dann langsam an und stellen Sie sicher, dass die Spitzen während des gesamten Zuges vollständig untergetaucht sind, um Lufteinschlüsse zu reduzieren. Rückwärtspipettieren kann bei Proben, die zu Blasen neigen, zusätzliche Kontrolle bieten. 

Da Verdrängerpipetten keinen Luftspalt haben, ist es weniger wahrscheinlich, dass Blasen ihre Genauigkeit beeinträchtigen. Beim Pipettieren vieler Aliquots von Flüssigkeiten, die Blasen bilden, hilft eine elektronische Repeater-Pipette wie Nanorep , Probleme zu vermeiden. Manuelle Verdrängerpipetten sind auch hilfreich bei Experimenten mit niedrigerem Durchsatz, bei denen Genauigkeit wichtig ist.

Halten Sie eine Pipette beim Aspirieren so nah wie möglich an der Vertikalen und vermeiden Sie einen Winkel von mehr als 20° von der Y-Achse. Wenn Sie beim Dosieren die Wand des Zielgefäßes berühren, um die gesamte Flüssigkeit vollständig aus der Spitze zu ziehen, ist es in Ordnung, den 20°-Winkel zu überschreiten.

Das Vorwärtspipettieren ist die Standard-Pipettiertechnik und die beste Wahl für wässrige Proben. Bei viskosen und flüchtigen Proben bietet das Rückwärtspipettieren eine bessere Genauigkeit.

Um die Pipette vorwärts zu schieben, drücken Sie den Kolben bis zum ersten Anschlag, während Sie die Pipette außerhalb der Flüssigkeit halten. Tauchen Sie dann die Spitze 2-10 mm tief in die Flüssigkeit ein, mit der Sie arbeiten – nicht tiefer. Lassen Sie den Kolben langsam bis zur vollen Ausdehnung los, um das gesamte Flüssigkeitsvolumen anzusaugen. Um in Ihr Zielgefäß zu dosieren, bewegen Sie die Pipette in das Gefäß und drücken Sie dann den Kolben gleichmäßig durch den ersten Anschlag bis zum zweiten Anschlag – so weit der Kolben reicht. Wenn der Kolben vollständig gedrückt ist, ziehen Sie die Spitze der Pipette leicht an der Wand des Gefäßes nach oben, um sie zu berühren. Dies hilft, das volle Flüssigkeitsvolumen vollständig abzugeben. Lassen Sie den Kolben los, werfen Sie die Pipettenspitze aus, setzen Sie eine neue Pipettenspitze ein und wiederholen Sie den Vorgang.

Um die Pipette umzukehren, schieben Sie den Kolben ganz nach unten durch den ersten Anschlag bis zum zweiten Anschlag – so weit der Kolben reicht. Tauchen Sie dann die Spitze in Flüssigkeit und lassen Sie den Kolben langsam und gleichmäßig los, um ihn anzusaugen. Bewegen Sie sich zum Aufnahmegefäß und drücken Sie den Kolben NUR BIS ZUM ERSTEN ANSCHLAG, um das richtige Volumen abzugeben. In der Pipettenspitze verbleibt ein kleines Restvolumen. Bewegen Sie die Pipette über ein Dosiergefäß und drücken Sie den Kolben den Rest des Weges nach unten bis zum zweiten Anschlag, der auch als "Ausblasstopp" bezeichnet wird, um die restliche Flüssigkeit abzulassen. 

Lassen Sie den Kolben los, werfen Sie die Pipettenspitze aus, setzen Sie eine neue Pipettenspitze ein und wiederholen Sie den Vorgang.

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Eine Luftverdrängungspipette kann zum Pipettieren von leicht viskosen Flüssigkeiten, einschließlich Blut, verwendet werden. Um maximale Genauigkeit zu erreichen, verwenden Sie die oben beschriebene Reverse-Pipettiertechnik. Bei viskoseren Flüssigkeiten, wie z. B. 85 % Glycerin oder Triton X-100, bietet eine Verdrängerpipette die beste Genauigkeit und Konsistenz.

Leicht flüchtige Flüssigkeiten wie Ethanol können mit einer Luftverdrängerpipette unter Verwendung der oben erwähnten Reverse-Pipettiertechnik pipettiert werden. Verdrängerpipetten sind jedoch die bessere Wahl für flüchtige Flüssigkeiten. 

Wenn Sie eine Luftverdrängerpipette verwenden, spülen Sie die Pipettenspitze mindestens fünfmal vor dem Pipettieren des Volumens vor (aspirieren und dispensieren). Dadurch wird die Luft in der Pipette ausgeglichen und die Verdampfungsrate der Flüssigkeit verlangsamt. Die schnelle Verdunstung flüchtiger Flüssigkeiten dehnt die Luft in einer Pipette aus und drückt die Flüssigkeit aus der Spitze, ohne dass Druck auf den Kolben ausgeübt wird, was die genaue Volumenabgabe verringert.

Flüchtige Flüssigkeiten wie Acetonitril lassen sich im Allgemeinen besser mit einer Verdrängerpipette handhaben.

Ja, beim Pipettieren mit Luftverdrängerpipetten können Aerosole entstehen. Aerosole können in das Innere der Pipette aufsteigen und die Innenwände und den Kolben verunreinigen. Die Aerosolisierung tritt leichter auf, wenn der Kolben während der Aspiration zu schnell losgelassen wird, und kann bei zu schneller Abgabe auch in die entgegengesetzte Richtung außerhalb der Pipette erfolgen. 

Um Aerosole zu minimieren, aspirieren und dosieren Sie langsam und gleichmäßig. Verwenden Sie gefilterte Tipps. 

Pipetten mit positiver Verdrängung verwenden spritzenartige Spitzen, die eine Aerosolisierung verhindern. Eine Verdrängerpipette ist die beste Wahl für das Pipettieren von gefährlichen Flüssigkeiten und Flüssigkeiten mit erhöhter Viskosität oder Flüchtigkeit.

Sehr kalte oder heiße Flüssigkeiten verändern den Luftdruck in Luftverdrängungspipetten, was zu ungenauem Pipettieren führt. 

Pipetten mit Verdränger, mit spritzenartigen Spitzen, die keine Lufteinschlüsse zwischen Flüssigkeit und Kolben haben, werden von unterschiedlichen Temperaturen der Flüssigkeiten nicht beeinflusst. Pipetten mit positiver Verdrängung liefern genaue Ergebnisse mit Flüssigkeiten außerhalb der Raumtemperatur.

Wenn Sie eine sehr heiße oder kalte Flüssigkeit mit einer Luftverdrängerpipette pipettieren müssen, spülen Sie die Pipettenspitze nicht vor – dies ist in der Regel die beste Vorgehensweise für höchste Genauigkeit. Saugen und dosieren Sie stattdessen zügig, um den Einfluss der Flüssigkeitstemperatur auf den inneren Luftspalt der Pipette zu minimieren.

Um Blasen und Schaumbildung beim Pipettieren zu vermeiden, tauchen Sie die Spitze nicht mehr als 10 mm in das Flüssigkeitsreservoir und saugen Sie sie langsam an.

Das Rückwärtspipettieren bietet zusätzlichen Schutz, da Sie vor dem Aspirieren den Kolben vollständig bis zum 2. Anschlag drücken, so dass keine Möglichkeit besteht, Luft in die flüssige Probe zu injizieren. Weitere Informationen zum Rückwärtspipettieren finden Sie auf dieser Seite. 

Eine Pipette mit positiver Verdrängung erzeugt bei der Interaktion mit Flüssigkeit keine Blasen oder Schaum, da ihre spritzenartige Spitze keine Luft enthält, mit der die Flüssigkeit interagieren kann.

Dekontaminieren Sie eine Pipette, indem Sie sie mit einem feuchten Tuch und einem Reinigungsmittel wie Isopropanol oder einer 10%igen Bleichlösung abwischen. Vermeiden Sie das durchsichtige Kunststofffenster des Mikrometers.

Autoklavieren kann eine weitere Option sein, aber überprüfen Sie die Spezifikationen Ihres Instruments. Wenn es autoklavierbar ist, wird dann das gesamte Instrument autoklaviert oder nur das flüssige Ende?  Oft kann nur das flüssige Ende autoklaviert werden.

Weitere Informationen zum Reinigen einer Pipette finden Sie auf dem Poster zum Reinigen einer Pipette .

Reaktive Chemikalien müssen mit Vorsicht gehandhabt werden. Verwenden Sie frische, inerte Spitzen und besprühen Sie die Außenseite der Pipette regelmäßig mit Ethanol, um Spritzer und Rückstände zu entfernen. Vermeiden Sie den Kontakt der Spitze mit Oberflächen und wechseln Sie die Pipettenspitzen häufig, um einen Kreuzkontakt zu vermeiden.

Rainin-Pipetten sind weithin für ihren sicheren Spitzeneingriff und ihre reibungslose Kolbensteuerung bekannt und unterstützen sichere, kontaminationsfreie Übertragungen, selbst bei der Arbeit mit anspruchsvollen, reaktiven Reagenzien.

Die Pipettengenauigkeit – oder Richtigkeit, wie sie heute genannt wird – ist die Differenz zwischen dem mittleren Volumen aller Messungen (4-10 Messungen) und dem eingestellten Volumen. Wenn es um die Präzision einer Pipette geht, wird dies als Standardabweichung aller durchgeführten Messungen erklärt. 

Die Unsicherheit einer Pipette ist der quantitative Begriff für ihre Gesamtgenauigkeit. Es ist eine Kombination aus Richtigkeit (ein Maß für systematische Fehler) und Präzision (ein Maß für zufällige Fehler). 

Die Gleichung für die Unsicherheit lautet: 

Unsicherheit = Systematischer Fehler + Zufallsfehler * k. k (Abdeckungsfaktor oder Z-Score) hängt von der Anzahl der Messungen ab. k=3,31 für vier Messungen und 2 für zehn Messungen.

Weitere Informationen zur Pipettenunsicherheit und zur Gewährleistung der Genauigkeit finden Sie in diesem Whitepaper.