Melhore seus dados com boas práticas de pipetagem

Líquidos de alta pressão de vapor podem causar mudanças rápidas de concentração se expostos ao ar por muito tempo. Molhe previamente a ponta, trabalhe rapidamente e mantenha os recipientes tampados sempre que possível. A técnica de aspiração consistente, incluindo a opção de pipetagem reversa, pode ajudar a estabilizar os volumes.

Como as pipetas de deslocamento positivo não possuem entreferro, elas são mais precisas com líquidos com alta pressão de vapor. Assim, eles são recomendados se a precisão for vital para a aplicação. 

Escolher a pipeta certa envolve avaliar suas necessidades. Primeiro, que tipo de amostras você está pipetando? Eles são aquosos? Ou são viscosos, voláteis, espumantes, corrosivos ou perigosos? Para líquidos aquosos e quase aquosos, as pipetas de deslocamento de ar mais comuns (também chamadas de pipetas de "almofada de ar") são uma boa escolha. Para tipos de líquidos viscosos, voláteis e outros tipos de líquidos incomuns, uma pipeta de deslocamento positivo seria a melhor escolha para precisão e segurança. 

Qual volume você vai pipetar? Quantas amostras você precisa transferir de um vaso para outro? Confira este white paper sobre seleção de pipetas para entender qual pipeta funciona melhor, dependendo do líquido e de outros fatores exclusivos da sua situação.

Os ensaios microfluídicos exigem precisão intransigente. Estabilize sua mão de pipetagem, use pontas de alta qualidade projetadas para volumes ultrabaixos e considere a pipetagem reversa para melhorar a consistência. A calibração regular, juntamente com o controle de fatores ambientais como temperatura, suporta a precisão nessas escalas. 

As pipetas Rainin, combinadas com ponteiras de microvolume finamente projetadas, oferecem o controle preciso e confiável de que você precisa para obter excelentes resultados em experimentos microfluídicos de ponta.

Ao pipetar soluções espessas com uma pipeta multicanal, as bolhas de ar introduzem erros de volume e complicam as medições. Para reduzir o risco de bolhas, umedeça previamente as pontas aspirando e dispensando lentamente 2 a 3 vezes. Em seguida, aspire lentamente, garantindo que as pontas estejam totalmente submersas durante todo o sorteio para reduzir as bolsas de ar. A pipetagem reversa pode fornecer controle adicional em amostras propensas a bolhas. 

Como as pipetas de deslocamento positivo não possuem um entreferro, as bolhas têm menos probabilidade de afetar sua precisão. Ao pipetar muitas alíquotas de líquidos que formam bolhas, uma pipeta repetidora eletrônica como a Nanorep ajudará a evitar problemas. As pipetas manuais de deslocamento positivo também são úteis em experimentos de menor rendimento, onde a precisão é importante.

Ao aspirar, segure uma pipeta o mais próximo possível da vertical, evitando qualquer ângulo maior que 20° em relação ao eixo Y. Ao dispensar, se você estiver tocando na parede do recipiente alvo para puxar totalmente todo o líquido da ponta, não há problema em exceder o ângulo de 20°.

A pipetagem direta é a técnica de pipetagem padrão e a melhor escolha para amostras aquosas. Para amostras viscosas e voláteis, a pipetagem reversa oferece melhor precisão.

Para avançar a pipeta, empurre o êmbolo para baixo até o primeiro batente, enquanto segura a pipeta fora do líquido. Em seguida, mergulhe a ponta de 2 a 10 mm de profundidade no líquido com o qual você está trabalhando – não mais fundo. Solte o êmbolo lentamente até a extensão total para aspirar o volume total do líquido. Para dispensar em seu recipiente alvo, mova a pipeta para dentro do recipiente e, em seguida, pressione o êmbolo a uma taxa uniforme através da primeira parada até a segunda parada - até o êmbolo ir. Com o êmbolo totalmente pressionado, arraste levemente a ponta da pipeta pela parede do recipiente para "tocar". Isso ajuda a dispensar completamente todo o volume de líquido. Solte o êmbolo, ejete a ponta da pipeta, carregue uma nova ponta da pipeta e repita.

Para inverter a pipeta, empurre o êmbolo totalmente para baixo através da primeira parada até a segunda parada – até onde o êmbolo vai. Em seguida, mergulhe a ponta no líquido e solte lenta e uniformemente o êmbolo para aspirar. Mova para o recipiente receptor e pressione o êmbolo SOMENTE ATÉ A PRIMEIRA PARADA para dispensar o volume correto. Um pequeno volume residual permanecerá na ponta da pipeta. Mova a pipeta sobre um recipiente de descarte e distribuição e pressione o êmbolo até o segundo batente, também chamado de batente de "explosão", para liberar qualquer líquido restante. 

Solte o êmbolo, ejete a ponta da pipeta, carregue uma nova ponta da pipeta e repita.

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Uma pipeta de deslocamento de ar pode ser usada para pipetar líquidos levemente viscosos, incluindo sangue. Para obter a máxima precisão, use a técnica de pipetagem reversa descrita acima. Para líquidos mais viscosos, como glicerol a 85% ou Triton X-100, uma pipeta de deslocamento positivo oferece a melhor precisão e consistência.

Líquidos ligeiramente voláteis, como o etanol, podem ser pipetados com uma pipeta de deslocamento de ar usando a técnica de pipetagem reversa mencionada acima. No entanto, as pipetas de deslocamento positivo são a melhor escolha para líquidos voláteis. 

Se estiver usando uma pipeta de deslocamento de ar, pré-enxágue a ponta da pipeta (aspire e dispense) pelo menos cinco vezes antes de pipetar o volume. Isso equilibra o ar dentro da pipeta, diminuindo a taxa de evaporação do líquido. A evaporação rápida de líquidos voláteis expande o ar dentro de uma pipeta e força o líquido da ponta sem que nenhuma pressão seja colocada no êmbolo, e isso diminui a entrega precisa do volume.

Líquidos voláteis, como acetonitrila, geralmente são melhor manuseados com uma pipeta de deslocamento positivo.

Sim, a pipetagem com pipetas de deslocamento de ar pode criar aerossóis. Os aerossóis podem subir para o interior da pipeta e contaminar as paredes internas e o pistão. A aerossolização ocorre mais prontamente quando o êmbolo é liberado muito rapidamente durante a aspiração e também pode ocorrer na direção oposta fora da pipeta com dispensação excessivamente rápida. 

Para minimizar os aerossóis, aspire e dispense lenta e uniformemente. Use dicas filtradas. 

As pipetas de deslocamento positivo usam pontas do tipo seringa que evitam a aerossolização. Uma pipeta de deslocamento positivo é a melhor escolha para pipetar líquidos perigosos e qualquer líquido de viscosidade ou volatilidade elevada.

Líquidos muito frios ou quentes alteram a pressão do ar dentro das pipetas de deslocamento de ar, levando a uma pipetagem imprecisa. 

As pipetas de deslocamento positivo, com pontas tipo seringa que não têm bolsa de ar entre o líquido e o pistão, não são afetadas por diferentes temperaturas dos líquidos. As pipetas de deslocamento positivo fornecerão resultados precisos com líquidos que não sejam à temperatura ambiente.

Se você precisar pipetar um líquido muito quente ou frio com uma pipeta de deslocamento de ar, não enxágue previamente a ponta da pipeta - essa é normalmente a prática recomendada para a mais alta precisão. Em vez disso, aspire e dispense rapidamente para minimizar o efeito da temperatura do líquido no entreferro interno da pipeta.

Para evitar bolhas e formação de espuma ao pipetar, não mergulhe a ponta mais de 10 mm no reservatório de líquido e aspire lentamente.

A pipetagem reversa oferece proteção adicional porque, antes de aspirar, você pressiona totalmente o êmbolo até a 2ª parada, para que não haja chance de injetar ar na amostra líquida. Para saber mais sobre pipetagem reversa, visite esta página. 

Uma pipeta de deslocamento positivo não cria bolhas ou espuma ao interagir com o líquido porque sua ponta tipo seringa não apresenta ar para o líquido interagir.

Descontamine uma pipeta limpando-a com um pano úmido e um detergente como isopropanol ou uma solução de alvejante a 10%. Evite a janela de plástico transparente do micrômetro.

A autoclavagem pode ser outra opção, mas verifique as especificações do instrumento da sua pipeta. Se for autoclavável, todo o instrumento é autoclavado ou apenas a extremidade líquida?  Muitas vezes, apenas a extremidade líquida pode ser autoclavada.

Para obter mais informações sobre como limpar uma pipeta, obtenha o pôster Limpando uma pipeta .

Os produtos químicos reativos devem ser manuseados com cuidado. Use pontas frescas e inertes e borrife o exterior da pipeta com etanol regularmente para remover respingos e resíduos. Evite o contato da ponteira com as superfícies e troque as ponteiras da pipeta com frequência para evitar o contato cruzado.

Amplamente consideradas por seu engate seguro da ponteira e controle suave do êmbolo, as pipetas Rainin suportam transferências seguras e livres de contaminação, mesmo quando trabalham com reagentes reativos desafiadores.

A precisão da pipeta - ou veracidade, como é chamada agora - é a diferença entre o volume médio de todas as medições (4-10 medições) e o volume definido. Ao discutir a precisão de uma pipeta, isso é explicado como o desvio padrão de todas as medições realizadas. 

A incerteza de uma pipeta é o termo quantitativo para sua precisão geral. É uma combinação de veracidade (uma medida de erro sistemático) e precisão (uma medida de erro aleatório). 

A equação para a incerteza é: 

Incerteza = Erro Sistemático + Erro Aleatório * k. k (fator de cobertura ou escore Z) depende do número de medições. k=3,31 para quatro medidas e 2 para dez medidas.

Para obter mais informações sobre a incerteza da pipeta e garantir a precisão, baixe este white paper.