Améliorez vos données grâce à de bonnes pratiques de pipetage

Les liquides à haute pression de vapeur peuvent provoquer des changements de concentration rapides s’ils sont exposés à l’air pendant trop longtemps. Mouillez à l’avance la pointe, travaillez rapidement et gardez les contenants bouchés dans la mesure du possible. Une technique d’aspiration cohérente, y compris l’option du pipetage inverse, peut aider à stabiliser les volumes.

Comme les pipettes à déplacement positif n’ont pas d’espace d’air, elles sont plus précises avec des liquides à haute pression de vapeur. Ainsi, ils sont recommandés si la précision est vitale pour l’application. 

Pour choisir la bonne pipette , il faut évaluer vos besoins. Tout d’abord, quel type d’échantillons pipetez-vous ? Sont-ils aqueux ? Ou sont-ils visqueux, volatils, moussants, corrosifs ou dangereux ? Pour les liquides aqueux et quasi aqueux, les pipettes à déplacement d’air les plus courantes (également appelées pipettes à « coussin d’air ») sont un bon choix. Pour les liquides visqueux, volatils et autres types de liquides inhabituels, une pipette à déplacement positif serait un meilleur choix pour la précision et la sécurité. 

Quel volume allez-vous pipeter ? Combien d’échantillons devez-vous transférer d’un récipient à un autre ? Consultez ce livre blanc sur la sélection des pipettes pour comprendre quelle pipette fonctionne le mieux en fonction du liquide et d’autres facteurs propres à votre situation.

Les tests microfluidiques exigent une précision sans compromis. Stabilisez votre main de pipetage, utilisez des pointes de haute qualité conçues pour des volumes ultra-faibles et envisagez le pipetage inversé pour une meilleure cohérence. Un étalonnage régulier, ainsi que le contrôle des facteurs environnementaux tels que la température, favorisent la précision à ces échelles. 

Les pipettes Rainin, associées à des pointes micro-volumes finement conçues, offrent le contrôle précis et fiable dont vous avez besoin pour obtenir d’excellents résultats dans des expériences microfluidiques de pointe.

Lors du pipetage de solutions épaisses à l’aide d’une pipette multicanaux, les bulles d’air introduisent des erreurs de volume et compliquent les mesures. Pour réduire votre risque de bulles, pré-mouillez les pointes en aspirant et en distribuant lentement 2 à 3 fois. Ensuite, aspirez lentement, en vous assurant que les pointes sont complètement immergées tout au long du tirage pour réduire les poches d’air. Le pipetage inversé peut fournir un contrôle supplémentaire dans les échantillons sujets aux bulles. 

Étant donné que les pipettes à déplacement positif n’ont pas d’espace d’air, les bulles sont moins susceptibles d’affecter leur précision. Lors du pipetage de nombreuses aliquotes de liquides qui forment des bulles, une pipette à répéteur électronique comme Nanorep aidera à éviter les problèmes. Les pipettes à déplacement positif manuelles sont également utiles pour les expériences à faible débit où la précision est importante.

Lors de l’aspiration, tenez une pipette aussi près que possible de la verticale, en évitant tout angle supérieur à 20° par rapport à l’axe Y. Lors de la distribution, si vous touchez la paroi du récipient cible afin d’extraire complètement tout le liquide de la pointe, vous pouvez dépasser l’angle de 20°.

Le pipetage direct est la technique de pipetage standard et le meilleur choix pour les échantillons aqueux. Pour les échantillons visqueux et volatils, le pipetage inverse offre une meilleure précision.

Pour faire avancer la pipette, poussez le piston vers le bas jusqu’à la première butée tout en tenant la pipette à l’extérieur du liquide. Ensuite, plongez l’embout à une profondeur de 2 à 10 mm dans le liquide avec lequel vous travaillez, sans plus de profondeur. Relâchez lentement le piston jusqu’à l’extension complète pour aspirer tout le volume de liquide. Pour distribuer dans votre récipient cible, déplacez la pipette dans le récipient, puis appuyez sur le piston à un rythme régulier de la première butée jusqu’à la deuxième butée, jusqu’à la deuxième butée, jusqu’à ce que le piston aille. Avec le piston complètement enfoncé, faites glisser légèrement la pointe de la pipette le long de la paroi du récipient pour « toucher ». Cela permet de distribuer complètement le volume total de liquide. Relâchez le piston, éjectez la pointe de la pipette, chargez une nouvelle pointe de pipette et répétez l’opération.

Pour inverser la pipette, poussez le piston à fond de la première butée jusqu’à la deuxième butée, dans la mesure où le piston va. Ensuite, plongez l’embout dans un liquide et relâchez lentement et uniformément le piston pour aspirer. Déplacez-vous vers le récipient récepteur et appuyez sur le piston UNIQUEMENT JUSQU’À LA PREMIÈRE BUTÉE pour distribuer le volume correct. Un petit volume résiduel restera dans la pointe de la pipette. Déplacez la pipette au-dessus d’un récipient de distribution-mise au rebut et appuyez sur le piston jusqu’à la deuxième butée, également appelée butée de « soufflage », pour libérer le liquide restant. 

Relâchez le piston, éjectez la pointe de la pipette, chargez une nouvelle pointe de pipette et répétez l’opération.

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Une pipette à déplacement d’air peut être utilisée pour pipeter des liquides légèrement visqueux, y compris du sang. Pour obtenir une précision maximale, utilisez la technique de pipetage inverse décrite ci-dessus. Pour les liquides plus visqueux, tels que le glycérol à 85 % ou le Triton X-100, une pipette à déplacement positif offre la meilleure précision et la meilleure consistance.

Les liquides légèrement volatils tels que l’éthanol peuvent être pipetés à l’aide d’une pipette à déplacement d’air en utilisant la technique de pipetage inversé mentionnée ci-dessus. Cependant, les pipettes à déplacement positif sont un meilleur choix pour les liquides volatils. 

Si vous utilisez une pipette à déplacement d’air, pré-rincez la pointe de la pipette (aspiration et distribution) au moins cinq fois avant de pipeter votre volume. Cela équilibre l’air à l’intérieur de la pipette, ralentissant ainsi le taux d’évaporation du liquide. L’évaporation rapide des liquides volatils dilate l’air à l’intérieur d’une pipette et force le liquide à s’échapper de la pointe sans qu’aucune pression ne soit exercée sur le piston, ce qui diminue la précision de la distribution du volume.

Les liquides volatils tels que l’acétonitrile sont généralement mieux manipulés avec une pipette à déplacement positif.

Oui, le pipetage avec des pipettes à déplacement d’air peut créer des aérosols. Les aérosols peuvent remonter à l’intérieur de la pipette et contaminer les parois intérieures et le piston. L’aérosolisation se produit plus facilement lorsque le piston est libéré trop rapidement pendant l’aspiration et peut également se produire dans la direction opposée à l’extérieur de la pipette avec une distribution trop rapide. 

Pour minimiser les aérosols, aspirez et distribuez lentement et uniformément. Utilisez des pointes filtrées. 

Les pipettes à déplacement positif utilisent des pointes de type seringue qui empêchent l’aérosolisation. Une pipette à déplacement positif est le meilleur choix pour le pipetage de liquides dangereux et de tout liquide de viscosité ou de volatilité élevée.

Les liquides très froids ou chauds modifient la pression de l’air à l’intérieur des pipettes à déplacement d’air, ce qui entraîne un pipetage imprécis. 

Les pipettes à déplacement positif, avec des embouts de type seringue qui n’ont pas de poche d’air entre le liquide et le piston, ne sont pas affectées par les différentes températures des liquides. Les pipettes à déplacement positif fourniront des résultats précis avec des liquides à température non ambiante.

Si vous devez pipeter un liquide très chaud ou froid avec une pipette à déplacement d’air, ne pré-rincez pas la pointe de la pipette, c’est généralement la meilleure pratique pour une précision maximale. Au lieu de cela, aspirez et distribuez rapidement pour minimiser l’effet de la température du liquide sur l’espace d’air intérieur de la pipette.

Pour éviter les bulles et la formation de mousse lors du pipetage, ne plongez pas la pointe à plus de 10 mm dans le réservoir de liquide et aspirez lentement.

Le pipetage inversé offre une protection supplémentaire car, avant d’aspirer, vous appuyez à fond sur le piston jusqu’à la 2e butée, de sorte qu’il n’y a aucune chance d’injecter de l’air dans l’échantillon liquide. Pour en savoir plus sur le pipetage inverse, visitez cette page. 

Une pipette à déplacement positif ne crée pas de bulles ou de mousse lorsqu’elle interagit avec un liquide, car son embout de type seringue ne présente pas d’air avec lequel le liquide peut interagir.

Décontaminez une pipette en l’essuyant avec un chiffon humide et un détergent comme l’isopropanol ou une solution d’eau de Javel à 10 %. Évitez la fenêtre en plastique transparent du micromètre.

L’autoclave peut être une autre option, mais vérifiez les spécifications de l’instrument de votre pipette. S’il est autoclavable, l’ensemble de l’instrument est-il autoclavé ou seulement l’extrémité liquide ?  Souvent, seule l’extrémité liquide peut être autoclavée.

Pour en savoir plus sur le nettoyage d’une pipette, procurez-vous l’affiche Nettoyage d’une pipette .

Les produits chimiques réactifs doivent être manipulés avec soin. Utilisez des pointes neuves et inertes et vaporisez régulièrement l’extérieur de la pipette avec de l’éthanol pour éliminer les éclaboussures et les résidus. Évitez tout contact des pointes avec les surfaces et changez fréquemment les pointes de pipette pour éviter les contacts croisés.

Largement appréciées pour leur engagement sûr de la pointe et leur contrôle en douceur du piston, les pipettes Rainin permettent des transferts sûrs et sans contamination, même lorsque vous travaillez avec des réactifs réactifs difficiles.

La précision de la pipette, ou la justesse, comme on l’appelle aujourd’hui, est la différence entre le volume moyen de toutes les mesures (4 à 10 mesures) et le volume réglé. Lorsque l’on discute de la précision d’une pipette, elle est expliquée comme l’écart-type de toutes les mesures effectuées. 

L’incertitude d’une pipette est le terme quantitatif désignant sa précision globale. Il s’agit d’une combinaison de justesse (une mesure de l’erreur systématique) et de précision (une mesure de l’erreur aléatoire). 

L’équation de l’incertitude est la suivante : 

Incertitude = Erreur systématique + Erreur aléatoire * k. k (facteur de couverture ou score Z) dépend du nombre de mesures. k = 3,31 pour quatre mesures et 2 pour dix mesures.

Pour plus d’informations sur l’incertitude des pipettes et la garantie de leur précision, téléchargez ce livre blanc.