Mejore sus datos con buenas prácticas de pipeteo

Los líquidos de alta presión de vapor pueden causar cambios rápidos de concentración si se exponen al aire durante demasiado tiempo. Humedezca previamente la punta, trabaje rápidamente y mantenga los recipientes tapados siempre que sea posible. Una técnica de aspiración constante, incluida la opción de pipeteo inverso, puede ayudar a estabilizar los volúmenes.

Debido a que las pipetas de desplazamiento positivo carecen de espacio de aire, son más precisas con líquidos con una alta presión de vapor. Por lo tanto, se recomiendan si la precisión es vital para la aplicación. 

Elegir la pipeta adecuada implica evaluar sus requisitos. Primero, ¿qué tipo de muestras está pipeteando? ¿Son acuosas? ¿O son viscosas, volátiles, espumosas, corrosivas o peligrosas? Para líquidos acuosos y casi acuosos, las pipetas de desplazamiento de aire más comunes (también llamadas pipetas de "colchón de aire") son una buena opción. Para tipos de líquidos viscosos, volátiles y otros tipos de líquidos inusuales, una pipeta de desplazamiento positivo sería una mejor opción tanto por su precisión como por su seguridad. 

¿Qué volumen va a pipetear? ¿Cuántas muestras necesita transferir de un recipiente a otro? Consulte este documento técnico sobre la selección de pipetas para comprender qué pipeta funciona mejor en función del líquido y otros factores exclusivos de su situación.

Los ensayos microfluídicos exigen una precisión sin concesiones. Estabilice su mano de pipeteo, utilice puntas de alta calidad diseñadas para volúmenes ultra bajos y considere el pipeteo inverso para mejorar la consistencia. La calibración regular, junto con el control de factores ambientales como la temperatura, respalda la precisión en estas escalas. 

Las pipetas Rainin, combinadas con puntas de microvolumen finamente diseñadas, ofrecen el control preciso y fiable que necesita para lograr excelentes resultados en experimentos microfluídicos de vanguardia.

Al pipetear soluciones espesas con una pipeta multicanal, las burbujas de aire introducen errores de volumen y complican las mediciones. Para reducir el riesgo de burbujas, humedezca previamente las puntas aspirando y dispensando lentamente 2-3 veces. Luego, aspire lentamente, asegurándose de que las puntas estén completamente sumergidas durante todo el sorteo para reducir las bolsas de aire. El pipeteo inverso puede proporcionar un control adicional en muestras propensas a burbujas. 

Debido a que las pipetas de desplazamiento positivo carecen de un espacio de aire, es menos probable que las burbujas afecten su precisión. Al pipetear muchas alícuotas de líquidos que forman burbujas, una pipeta de repetición electrónica como Nanorep ayudará a evitar problemas. Las pipetas manuales de desplazamiento positivo también son útiles con experimentos de menor rendimiento en los que la precisión es importante.

Al aspirar, sostenga una pipeta lo más cerca posible de la vertical, evitando cualquier ángulo superior a 20° del eje Y. Al dispensar, si está tocando la pared del recipiente objetivo para extraer completamente todo el líquido de la punta, está bien exceder el ángulo de 20 °.

El pipeteo directo es la técnica de pipeteo estándar y la mejor opción para muestras acuosas. Para muestras viscosas y volátiles, el pipeteo inverso ofrece una mayor precisión.

Para avanzar la pipeta, empuje el émbolo hacia abajo hasta el primer tope mientras sostiene la pipeta fuera del líquido. Luego, sumerja la punta de 2 a 10 mm de profundidad en el líquido con el que está trabajando, no más profundo. Suelte el émbolo lentamente hasta su extensión completa para aspirar todo el volumen de líquido. Para dispensar en el recipiente objetivo, mueva la pipeta al recipiente y, a continuación, presione el émbolo a una velocidad uniforme a través del primer tope hasta el segundo tope, hasta el tope. Con el émbolo completamente presionado, arrastre ligeramente la punta de la pipeta por la pared del recipiente para "tocar". Esto ayuda a dispensar completamente el volumen total de líquido. Suelte el émbolo, expulse la punta de la pipeta, cargue una nueva punta de pipeta y repita.

Para invertir la pipeta, empuje el émbolo hasta el fondo desde el primer tope hasta el segundo tope, hasta donde llega el émbolo. Luego, sumerja la punta en líquido y suelte lenta y uniformemente el émbolo para aspirar. Muévase al recipiente receptor y presione el émbolo SOLO HASTA EL PRIMER TOPE para dispensar el volumen correcto. Quedará un pequeño volumen residual en la punta de la pipeta. Mueva la pipeta sobre un recipiente de dispensación de desecho y presione el émbolo hasta el segundo tope, también llamado tope de "reventón", para liberar cualquier líquido restante. 

Suelte el émbolo, expulse la punta de la pipeta, cargue una nueva punta de pipeta y repita.

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Se puede usar una pipeta de desplazamiento de aire para pipetear líquidos ligeramente viscosos, incluida la sangre. Para lograr la máxima precisión, utilice la técnica de pipeteo inverso descrita anteriormente. Para líquidos más viscosos, como glicerol al 85 % o Triton X-100, una pipeta de desplazamiento positivo ofrece la mejor precisión y consistencia.

Los líquidos ligeramente volátiles, como el etanol, se pueden pipetear con una pipeta de desplazamiento de aire utilizando la técnica de pipeteo inverso mencionada anteriormente. Sin embargo, las pipetas de desplazamiento positivo son una mejor opción para líquidos volátiles. 

Si utiliza una pipeta de desplazamiento de aire, enjuague previamente la punta de la pipeta (aspire y dispense) al menos cinco veces antes de pipetear su volumen. Esto equilibra el aire dentro de la pipeta, lo que ralentiza la velocidad de evaporación del líquido. La rápida evaporación de líquidos volátiles expande el aire dentro de una pipeta y fuerza el líquido desde la punta sin ejercer presión sobre el émbolo, lo que disminuye la entrega precisa del volumen.

Los líquidos volátiles como el acetonitrilo generalmente se manejan mejor con una pipeta de desplazamiento positivo.

Sí, el pipeteo con pipetas de desplazamiento de aire puede crear aerosoles. Los aerosoles pueden subir al interior de la pipeta y contaminar las paredes interiores y el pistón. La aerosolización se produce más fácilmente cuando el émbolo se libera demasiado rápido durante la aspiración y también puede producirse en la dirección opuesta fuera de la pipeta con una dispensación demasiado rápida. 

Para minimizar los aerosoles, aspire y dispense lenta y uniformemente. Usa puntas filtradas. 

Las pipetas de desplazamiento positivo utilizan puntas tipo jeringa que evitan la aerosolización. Una pipeta de desplazamiento positivo es la mejor opción para pipetear líquidos peligrosos y cualquier líquido de viscosidad o volatilidad elevada.

Los líquidos muy fríos o calientes cambian la presión del aire dentro de las pipetas de desplazamiento de aire, lo que provoca un pipeteo inexacto. 

Las pipetas de desplazamiento positivo, con puntas tipo jeringa que no tienen bolsa de aire entre el líquido y el pistón, no se ven afectadas por las diferentes temperaturas de los líquidos. Las pipetas de desplazamiento positivo ofrecerán resultados precisos con líquidos que no sean a temperatura ambiente.

Si debe pipetear un líquido muy caliente o frío con una pipeta de desplazamiento de aire, no enjuague previamente la punta de la pipeta, ya que esta suele ser la mejor práctica para obtener la mayor precisión. En su lugar, aspire y dispense rápidamente para minimizar el efecto de la temperatura del líquido en el espacio de aire interior de la pipeta.

Para evitar burbujas y formación de espuma al pipetear, no sumerja la punta más de 10 mm en el depósito de líquido y aspire lentamente.

El pipeteo inverso ofrece protección adicional porque, antes de aspirar, se presiona completamente el émbolo hasta el 2º tope, por lo que no hay posibilidad de inyectar aire en la muestra líquida. Para obtener más información sobre el pipeteo inverso, visite esta página. 

Una pipeta de desplazamiento positivo no crea burbujas ni espuma cuando interactúa con el líquido porque su punta tipo jeringa no presenta aire para que el líquido interactúe con él.

Descontamine una pipeta limpiándola con un paño húmedo y un detergente como isopropanol o una solución de lejía al 10%. Evite la ventana de plástico transparente del micrómetro.

El autoclave puede ser otra opción, pero verifique las especificaciones del instrumento de su pipeta. Si es esterilizable en autoclave, ¿se esteriliza en autoclave todo el instrumento o solo el extremo líquido?  A menudo, solo se puede esterilizar en autoclave el extremo líquido.

Para obtener más información sobre la limpieza de una pipeta, obtenga el póster Limpieza de una pipeta .

Los productos químicos reactivos deben manipularse con cuidado. Utilice puntas frescas e inertes y rocíe el exterior de la pipeta con etanol regularmente para eliminar salpicaduras y residuos. Evite el contacto de la punta con las superficies y cambie las puntas de la pipeta con frecuencia para evitar el contacto cruzado.

Ampliamente reconocidas por su acoplamiento seguro de la punta y su control suave del émbolo, las pipetas Rainin permiten transferencias seguras y libres de contaminación incluso cuando se trabaja con reactivos reactivos desafiantes.

La precisión de la pipeta, o veracidad, como se llama ahora, es la diferencia entre el volumen medio de todas las mediciones (4-10 mediciones) y el volumen establecido. Cuando se habla de la precisión de una pipeta, esto se explica como la desviación estándar de todas las mediciones realizadas. 

La incertidumbre de una pipeta es el término cuantitativo para su precisión general. Es una combinación de veracidad (una medida de error sistemático) y precisión (una medida de error aleatorio). 

La ecuación para la incertidumbre es: 

Incertidumbre = Error sistemático + Error aleatorio * k. k (factor de cobertura o puntuación Z) depende del número de mediciones. k=3,31 para cuatro mediciones y 2 para diez mediciones.

Para obtener más información sobre la incertidumbre de la pipeta y garantizar la precisión, descargue este documento técnico.