Izboljšajte svoje podatke z dobro prakso pipetiranja

Tekočine z visokim parnim tlakom lahko povzročijo hitre spremembe koncentracije, če so predolgo izpostavljene zraku. Konico predhodno navlažite, delajte hitro in posode zaprejte, kadar je to mogoče. Dosledna tehnika aspiracije, vključno z možnostjo povratnega pipetiranja, lahko pomaga stabilizirati volumne.

Ker pipete s prisilnim izpodrivom nimajo zračne reže, so natančnejše pri tekočinah z visokim parnim tlakom. Zato se priporočajo, če je natančnost ključnega pomena za uporabo. 

Izbira prave pipete vključuje oceno vaših zahtev. Prvič, kakšne vzorce pipetirate? Ali so vodne? Ali pa so viskozni, hlapni, peneči, jedki ali nevarni? Za vodne in skoraj vodne tekočine so najpogostejše pipete z zračnim izpodrivom (imenovane tudi pipete z zračno blazino). Za viskozne, hlapne in druge nenavadne vrste tekočin bi bila pipeta s pozitivnim izpodrivom boljša izbira za natančnost in varnost. 

Kakšen volumen boste pipetirali? Koliko vzorcev potrebujete za prenos iz enega plovila v drugega? Oglejte si to belo knjigo o izbiri pipet, da boste razumeli, katera pipeta je najboljša, odvisno od tekočine in drugih dejavnikov, ki so značilni za vašo situacijo.

Mikrofluidni testi zahtevajo brezkompromisno natančnost. Stabilizirajte roko za pipetiranje, uporabite visokokakovostne konice, zasnovane za izjemno majhne količine, in razmislite o obratnem pipetiranju za boljšo konsistenco. Redna kalibracija, skupaj z nadzorom okoljskih dejavnikov, kot je temperatura, podpira natančnost na teh lestvicah. 

Pipete Rainin v kombinaciji s fino izdelanimi mikroprostorninskimi konicami ponujajo natančen in zanesljiv nadzor, ki ga potrebujete za doseganje odličnih rezultatov v najsodobnejših mikrofluidnih poskusih.

Pri pipetiranju debelih raztopin z večkanalno pipeto zračni mehurčki povzročajo napake v prostornini in otežujejo meritve. Da bi zmanjšali tveganje za mehurčke, konice predhodno navlažite z aspiriranjem in počasim doziranjem 2-3 krat. Nato počasi aspirirajte in zagotovite, da so konice popolnoma potopljene skozi vlečenje, da zmanjšate zračne žepe. Povratno pipetiranje lahko zagotovi dodaten nadzor v vzorcih, ki so nagnjeni k mehurčkom. 

Ker pipete s pozitivnim premikom nimajo zračne reže, je manj verjetno, da bodo mehurčki vplivali na njihovo natančnost. Pri pipetiranju številnih alikvotov tekočin, ki tvorijo mehurčke, se bo elektronska repetitorska pipeta, kot je Nanorep , izognila težavam. Ročne pipete s pozitivnim premikom so koristne tudi pri poskusih z manjšo prepustnostjo, kjer je natančnost pomembna.

Pri sesanju držite pipeto čim bližje navpičnici, pri čemer se izogibajte kotu, ki je večji od 20° od osi Y. Če se pri razdeljevanju dotaknete stene ciljne posode, da bi popolnoma izvlekli vso tekočino iz konice, je v redu, da presežete kot 20 °.

Pipetiranje naprej je standardna tehnika pipetiranja in najboljša izbira za vodne vzorce. Pri viskoznih in hlapnih vzorcih povratno pipetiranje zagotavlja boljšo natančnost.

Če želite pipeto naprej, potisnite bat navzdol do prvega koraka, medtem ko držite pipeto zunaj tekočine. Nato potopite konico 2-10 mm globoko v tekočino, s katero delate – nič globlje. Počasi sprostite bat do polnega iztezanja, da vdihnete celoten volumen tekočine. Če želite brizgati v ciljno posodo, premaknite pipeto v posodo, nato pa z enakomerno hitrostjo pritisnite bat skozi prvo zaustavitev vse do druge zaustavitve – do konca bata. Ko je bat popolnoma pritisnjen, rahlo povlecite konico pipete navzgor po steni posode, da se »dotaknete«. To pomaga popolnoma razdeljevati celoten volumen tekočine. Spustite bat, izvrzite konico pipete, naložite novo konico pipete in ponovite.

Če želite vzvratno pipeto, potisnite bat do konca navzdol skozi prvo zaustavitev do druge zaustavitve – do konca bata. Nato potopite konico v tekočino in počasi in enakomerno sprostite bat za aspiracijo. Premaknite se do sprejemne posode in pritisnite bat SAMO DO PRVEGA STANJA, da se dozira pravilen volumen. Majhen preostali volumen ostane v konici pipete. Pipeto premaknite čez posodo za zavrženje in pritisnite bat do konca poti navzdol do druge postaje, imenovane tudi zaustavitev za izpihanje, da sprostite preostalo tekočino. 

Spustite bat, izvrzite konico pipete, naložite novo konico pipete in ponovite.

Iščete več nasvetov o tehnikah pipetiranja? Pridobite ta koristen plakat za svoj laboratorij še danes! 

Za pipetiranje rahlo viskoznih tekočin, vključno s krvjo, se lahko uporablja zračna pipeta . Da bi dosegli največjo natančnost, uporabite zgoraj opisano tehniko povratnega pipetiranja. Za bolj viskozne tekočine, kot sta 85-odstotni glicerol ali Triton X-100, pipeta s pozitivnim izpodrivom zagotavlja najboljšo natančnost in konsistenco.

Rahlo hlapne tekočine, kot je etanol, se lahko pipetirajo s pipeto za zračni premik z zgoraj omenjeno tehniko povratnega pipetiranja. Vendar pa so pipete s pozitivnim izpodrivom boljša izbira za hlapne tekočine. 

Če uporabljate pipeto z zračnim izpodrivom, pred pipetiranjem volumena vsaj petkrat sperite konico pipete (aspirirajte in oddejte). To uravnoteži zrak v pipeti in upočasni hitrost izhlapevanja tekočine. Hitro izhlapevanje hlapnih tekočin razširi zrak v pipeti in potisne tekočino iz konice, ne da bi bil pritisk na bat, kar zmanjša natančno dovajanje prostornine.

S hlapnimi tekočinami, kot je acetonitril, je na splošno bolje ravnati s pipeto s prisilnim izpodrivom.

Da, pipetiranje s pipetami za zračni premik lahko ustvari aerosole. Aerosoli se lahko dvignejo v notranjost pipete in onesnažijo notranje stene in bat. Aerosolizacija se pogosteje pojavi, če se bat med aspiracijo sprosti prehitro, lahko pa se pojavi tudi v nasprotni smeri zunaj pipete s prehitrem odmerjanjem. 

Da bi zmanjšali aerosole, aspirirajte in razdeljujte počasi in enakomerno. Uporabite filtrirane namige. 

Pipete s pozitivnim premikom uporabljajo konice v obliki brizge, ki preprečujejo aerosolizacijo. Pipeta s pozitivnim izpodrivom je najboljša izbira za pipetiranje nevarnih tekočin in vseh tekočin s povišano viskoznostjo ali hlapnostjo.

Zelo hladne ali vroče tekočine spremenijo zračni tlak v pipetah za izpodrivanje zraka, kar povzroči nenatančno pipetiranje. 

Na pipete s pozitivnim izpodrivom s konicami v obliki brizge, ki nimajo zračnega žepa med tekočino in batom, ne vplivajo različne temperature tekočin. Pipete s pozitivnim izpodrivom zagotavljajo natančne rezultate s tekočinami, ki niso sobne temperature.

Če morate pipetirati zelo vročo ali hladno tekočino s pipeto za izpodrivanje zraka, konice pipete ne sperite predhodno – to je običajno najboljša praksa za največjo natančnost. Namesto tega hitro odsihnite in razdeljujte, da zmanjšate vpliv temperature tekočine na notranjo zračno režo pipete.

Da bi se izognili mehurčkom in penjenju med pipetiranjem, konice ne potapljajte več kot 10 mm v rezervoar za tekočino in počasi odsihnite.

Povratno pipetiranje zagotavlja dodatno zaščito, saj pred sesanjem bat do konca popolnoma pritisnete na 2. stop, tako da ni možnosti, da bi v tekoči vzorec vbrizgali zrak. Za več informacij o obratnem pipetiranju obiščite to stran. 

Pipeta s pozitivnim premikom ne ustvarja mehurčkov ali pene pri interakciji s tekočino, ker njena konica v obliki brizge ne predstavlja zraka, s katerim bi tekočina lahko delovala.

Dekontaminirajte pipeto tako, da jo obrišete z mokro krpo in detergentom, kot je izopropanol ali 10% raztopina belila. Izogibajte se prozornemu plastičnemu oknu mikrometra.

Avtoklaviranje je morda še ena možnost, vendar preverite specifikacije instrumenta pipete. Če je mogoče avtoklavirati, ali je celoten instrument avtoklaviran ali samo tekoči konec?  Pogosto se lahko avtoklavira samo tekoči konec.

Če želite več informacij o čiščenju pipete, si priskrbite plakat Čiščenje pipete .

Z reaktivnimi kemikalijami je treba ravnati previdno. Uporabite sveže, inertne konice in redno razpršite zunanjost pipete z etanolom, da odstranite brizganje in ostanke. Preprečite stik konice s površinami in pogosto preklapljajte konice za pipete, da preprečite navzkrižni stik.

Pipete Rainin, ki so splošno cenjene zaradi varnega zaklepanja konice in gladkega krmiljenja bata, podpirajo varen prenos brez kontaminacije tudi pri delu z zahtevnimi, reaktivnimi reagenti.

Natančnost pipet - ali resničnost, kot jo imenujemo zdaj - je razlika med povprečno prostornino vseh meritev (4-10 meritev) in nastavljeno prostornino. Ko govorimo o natančnosti pipete, je to razloženo kot standardni odklon vseh opravljenih meritev. 

Negotovost pipete je kvantitativni izraz za njeno splošno točnost. Gre za kombinacijo resničnosti (merilo sistematične napake) in natančnosti (mera naključne napake). 

Enačba za negotovost je: 

Negotovost = sistematična napaka + naključna napaka * k. k (faktor pokritosti ali Z-rezultat) je odvisen od števila meritev. k = 3,31 za štiri meritve in 2 za deset meritev.

Če želite več informacij o negotovosti pipet in zagotavljanju natančnosti, prenesite to informativno knjigo.