ピペッティング技術－Good Pipetting Practiceによるデータの改善

蒸気圧の高い液体は、空気に長時間さらされると、急激な濃度変化を引き起こす可能性があります。チップを事前に濡らし、迅速に作業し、可能な限り容器に蓋をしておいてください。リバースピペッティングのオプションを含む一貫した吸引技術は、容量を安定させるのに役立ちます。

容積式ピペットにはエアギャップがないため、蒸気圧の高い液体でより正確です。したがって、アプリケーションにとって精度が重要な場合は、これらをお勧めします。 

適切な ピペット を選択するには、要件を評価する必要があります。まず、どのようなサンプルをピペッティングしていますか?それらは水性ですか?それとも、粘性、揮発性、発泡性、腐食性、または危険ですか?水性およびほぼ水性の液体には、最も一般的な空気置換ピペット(「エアクッション」ピペットとも呼ばれます)が適しています。粘性、揮発性、その他の異常な液体タイプの場合、精度と安全性の両方の点で容積式ピペットの方が適しています。 

どのくらいの量をピペッティングしますか?ある容器から別の容器に移送するには、いくつのサンプルが必要ですか? ピペットの選択に関するこのホワイトペーパー をチェックして、液体や状況に固有のその他の要因に応じてどのピペットが最適に機能するかを理解してください。

マイクロ流体アッセイでは、妥協のない精度が求められます。ピペッティングハンドを安定させ、超少量用に設計された高品質のチップを使用し、一貫性を向上させるためにリバースピペッティングを検討してください。定期的な校正と温度などの環境要因の制御により、これらのスケールでの精度がサポートされます。 

Raininピペットは、精巧に設計されたマイクロボリュームチップと組み合わせることで、最先端のマイクロ流体実験で優れた結果を達成するために必要な正確で信頼性の高い制御を提供します。

マルチチャンネルピペットで濃厚な溶液をピペッティングする場合、気泡によって体積誤差が発生し、測定が複雑になります。気泡のリスクを減らすために、2〜3回ゆっくりと吸引してディスペンスしてチップを事前に濡らしてください。次に、ゆっくりと吸引し、チップがドロー全体を通して完全に浸透し、エアポケットを減らします。リバースピペッティングは、気泡が発生しやすいサンプルをさらに制御できます。 

容積式ピペットにはエアギャップがないため、気泡が精度に影響を与える可能性は低くなります。気泡を形成する液体の多くのアリコートをピペッティングする場合、Nanorep のような 電子リピーターピペットは問題を回避するのに役立ちます。手動容積式ピペットは、精度が重要な低スループット実験にも役立ちます。

吸引するときは、ピペットをできるだけ垂直に近づけ、Y軸から20°を超える角度を避けてください。ディスペンス時に、先端からすべての液体を完全に引き抜くためにターゲット容器の壁に触れている場合は、20°の角度を超えても問題ありません。

フォワードピペッティングは標準的なピペッティング技術であり、水性サンプルに最適です。粘性のある揮発性サンプルの場合、リバースピペッティングの方が精度が高くなります。

ピペットを前進させるには、ピペットを液体の外側に保持しながら、プランジャーを最初の停止点まで押し下げます。次に、作業中の液体にチップを2〜10mmの深さに浸します。プランジャーをゆっくりと完全に伸ばすまで放し、液体量全体を吸引します。ターゲット容器に分注するには、ピペットを容器内に移動し、プランジャーを最初のストップから2番目のストップまで、プランジャーが行く限り、均等な速度で押します。プランジャーを完全に押した状態で、ピペットの先端を容器の壁に軽く引きずり上げて「タッチオフ」します。これにより、液体の全量を完全に分注できます。プランジャーを放し、ピペットチップを取り出し、新しいピペットチップをロードし、繰り返します。

ピペットを逆にするには、プランジャーを最初のストップから2番目のストップまで、プランジャーが行くところまで押し下げます。次に、チップを液体に浸し、プランジャーをゆっくりと均一に解放して吸引します。受入容器に移動し、プランジャーを最初の停止までのみ押して、正しい量を分注します。ピペットチップには少量の残留量が残ります。ピペットを廃棄分注容器の上に移動し、プランジャーを残りの部分まで押して、残りの部分を「ブローアウト」ストップとも呼ばれる2番目のストップまで押し下げて、残りの液体を放出します。 

プランジャーを放し、ピペットチップを取り出し、新しいピペットチップをロードし、繰り返します。

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空気置換 ピペット を使用して、血液を含むわずかに粘性のある液体をピペットでピペットできます。最高の精度を達成するには、上記のリバースピペッティング技術を使用します。85% グリセロールや Triton X-100 などの粘度の高い液体の場合は、容積式ピペットが最高の精度と一貫性を提供します。

エタノールなどのわずかに揮発性の液体は、上記の逆ピペッティング技術を使用して空気置換ピペットでピペッティングできます。ただし、揮発性液体には容積式ピペットの方が適しています。 

空気置換ピペットを使用する場合は、容量をピペッティングする前に、ピペットチップを少なくとも5回事前にすすぎます(吸引して分注してください)。これによりピペット内の空気が平衡化され、液体の蒸発速度が遅くなります。揮発性液体の急速な蒸発により、ピペット内の空気が膨張し、プランジャーに圧力をかけずにチップから液体が押し出され、これにより正確な容量供給が減少します。

アセトニトリルなどの揮発性液体は、一般に容積式ピペットでより適切に処理されます。

はい、空気置換ピペットを使用したピペッティングはエアロゾルを生成する可能性があります。エアロゾルはピペットの内部に上昇し、内壁やピストンを汚染する可能性があります。エアロゾル化は、吸引中にプランジャーが急速に解放されるとより容易に発生し、過度に速い分注でピペットの外側で反対方向に発生することもあります。 

エアロゾルを最小限に抑えるには、ゆっくりと均一に吸引して分注します。フィルター処理されたヒントを使用します。 

容積式ピペットは、エアロゾル化を防ぐシリンジ型チップを使用します。容積式ピペットは、危険な液体や粘度や揮発性が高い液体のピペッティングに最適です。

非常に冷たい液体や高温の液体は、空気置換ピペット内の空気圧を変化させ、ピペッティングが不正確になります。 

液体とピストンの間にエアポケットのないシリンジ式チップを備えた容積式ピペットは、液体の温度の違いの影響を受けません。容積式ピペットは、非室温の液体でも正確な結果をもたらします。

空気置換ピペットで非常に高温または低温の液体をピペットでピペットする必要がある場合は、ピペットチップを事前にすすぎないでください。代わりに、ピペットの内部エアギャップに対する液体の温度の影響を最小限に抑えるために、迅速に吸引して分注してください。

ピペッティング時の気泡や泡立ちを避けるため、チップを液体リザーバーに10mm以上浸さず、ゆっくりと吸引してください。

リバースピペッティングは、吸引する前にプランジャーを2番目のストップまで完全に押し込むため、液体サンプルに空気を注入する可能性がないため、追加の保護を提供します。リバースピペッティングの詳細については、 このページをご覧ください。 

容積式ピペットは、シリンジ型の先端が液体が相互作用する空気を存在しないため、液体と相互作用するときに気泡や泡を発生させません。

ピペットを濡れた布とイソプロパノールなどの洗剤または 10% 漂白剤溶液で拭いて除染します。マイクロメーターの透明なプラスチック窓は避けてください。

オートクレーブ滅菌も別のオプションかもしれませんが、ピペットの装置の仕様を確認してください。オートクレーブ滅菌可能な場合、装置全体がオートクレーブ滅菌されますか、それとも液体端のみがオートクレーブ滅菌されますか? 多くの場合、液体端のみをオートクレーブ滅菌できます。

ピペットのクリーニングの詳細については、 ピペットのクリーニングポ スターを入手してください。

反応性化学物質は慎重に取り扱う必要があります。新鮮な不活性チップを使用し、ピペットの外側に定期的にエタノールをスプレーして、飛沫や残留物を取り除きます。チップが表面に接触しないようにし、ピペットチップ を頻繁に切り替え て、相互接触を防ぎます。

安全なチップの噛み合いとスムーズなプランジャー制御で広く評価されているRaininピペット は、 困難な反応性試薬を扱う場合でも、安全で汚染のない移送をサポートします。

ピペットの精度(現在は真実度と呼ばれています)は、すべての測定値(4〜10回の測定)の平均量と設定された量の差です。ピペットの精度について議論する場合、これは実行されたすべての測定の標準偏差として説明されます。 

ピペットの不確かさは、その全体的な精度の定量的な用語です。これは、真度(系統誤差の尺度)と精度(ランダム誤差の尺度)の組み合わせです。 

不確実性の方程式は次のとおりです。 

不確かさ = 系統誤差 + ランダム誤差 * k。k (カバレッジ係数または Z スコア) は測定回数によって異なります。k=3.31 は 4 回の測定で、2 回の測定では 10 回の測定です。

ピペットの不確かさと精度の確保の詳細については、 このホワイトペーパーをダウンロードしてください。