Správná pipetovací praxe: Klíč ke kvalitním datům

Kapaliny s vysokým tlakem par mohou způsobit rychlé změny koncentrace, pokud jsou vystaveny vzduchu příliš dlouho. Špičku předem navlhčete, pracujte rychle a pokud je to možné, udržujte nádoby uzavřené. Konzistentní technika nabírání, včetně možnosti reverzního pipetování, může pomoci stabilizovat objemy.

Protože pipety s přímým posunutím nemají vzduchovou mezeru, jsou přesnější s kapalinami s vysokým tlakem par. Proto se doporučují, pokud je přesnost pro aplikaci zásadní. 

Výběr správné pipety začíná zhodnocením vašich potřeb. V první řadě zvažte, jaké vzorky budete pipetovat. Jsou na bázi vody, nebo se jedná o viskózní, těkavé, pěnivé, žíravé či nebezpečné kapaliny?

Pro kapaliny na vodní bázi jsou ideální pipety se vzduchovým polštářem, které patří k nejběžnějším typům (nazývané také pipety se vzduchovým polštářem). U viskózních, těkavých a jiných neobvyklých typů kapalin by byla pipeta s přímým posunutím lepší volbou jak z hlediska přesnosti, tak bezpečnosti. 

Jaký objem budete pipetovat? Kolik vzorků potřebujete přenést z jedné nádoby do druhé? Podívejte se na tuto bílou knihu o výběru pipet , abyste pochopili, která pipeta funguje nejlépe v závislosti na kapalině a dalších faktorech jedinečných pro vaši situaci.

Mikrofluidní testy vyžadují nekompromisní přesnost. Stabilizujte svou pipetovací ruku, používejte vysoce kvalitní špičky určené pro ultra nízké objemy a zvažte reverzní pipetování pro lepší konzistenci. Pravidelná kalibrace spolu s kontrolou faktorů prostředí, jako je teplota, podporuje přesnost na těchto škálách. 

Pipety Rainin ve spojení s precizně navrženými mikroobjemovými špičkami nabízejí přesné a spolehlivé ovládání, které potřebujete k dosažení vynikajících výsledků při špičkových mikrofluidních experimentech.

Při pipetování hustých roztoků pomocí vícekanálové pipety způsobují vzduchové bubliny objemové chyby a komplikují měření. Abyste snížili riziko vzniku bublin, předem navlhčete špičky odsáváním a pomalým dávkováním 2-3krát. Poté pomalu odsávejte a ujistěte se, že špičky jsou po celou dobu potahování zcela ponořené, aby se snížily vzduchové kapsy. Reverzní pipetování může poskytnout dodatečnou kontrolu u vzorků náchylných k bublinám. 

Vzhledem k tomu, že pipety s přímým posunutím nemají vzduchovou mezeru, je méně pravděpodobné, že bubliny ovlivní jejich přesnost. Při pipetování mnoha poměrných částí kapalin, které tvoří bubliny, vám elektronická opakovací pipeta, jako je Nanorep, pomůže vyhnout se problémům. Manuální pipety s přímým posunutím jsou také užitečné při experimentech s nižší propustností, kde je důležitá přesnost.

Při odsávání držte pipetu co nejblíže svislé poloze a vyhněte se jakémukoli úhlu většímu než 20° od osy Y. Pokud se při dávkování dotýkáte stěny cílové nádoby, abyste zcela vytáhli veškerou tekutinu ze špičky, je v pořádku překročit úhel 20°.

Dopředné pipetování je standardní pipetovací technika a je nejlepší volbou pro vodné vzorky. U viskózních a těkavých vzorků poskytuje reverzní pipetování vyšší přesnost.

Chcete-li pipetu posunout vpřed, zatlačte píst dolů na první doraz a držte pipetu mimo kapalinu. Poté ponořte špičku 2-10 mm hluboko do kapaliny, se kterou pracujete – ne hlouběji. Pomalu uvolněte píst až do úplného vysunutí, aby se odsál celý objem kapaliny. Chcete-li dávkovat do cílové nádoby, přesuňte pipetu do nádobky a poté rovnoměrně zatlačte píst přes první zarážku až k druhé zárážce – až k pístu. S plně stlačeným pístem lehce táhněte špičkou pipety nahoru po stěně nádobky, aby se "dotkla". To pomáhá zcela dávkovat celý objem tekutiny. Uvolněte píst, vysuňte pipetovací špičku, vložte novou pipetovací špičku a opakujte.

Chcete-li pipetu obrátit, zatlačte píst až na doraz přes první zarážku až k druhé zarážce – až po píst. Poté ponořte špičku do kapaliny a pomalu a rovnoměrně uvolněte píst k odsávání. Přesuňte se k přijímací nádobě a stiskněte píst POUZE NA PRVNÍ DORAZ, abyste vydávali správný objem. Ve špičce pipety zůstane malý zbytkový objem. Přesuňte pipetu nad nádobu na vyhození a zatlačte píst až na doraz až k druhému dorazu, nazývanému také "vyfukování", aby se uvolnila veškerá zbývající kapalina. 

Uvolněte píst, vysuňte pipetovací špičku, vložte novou pipetovací špičku a opakujte.

Hledáte další tipy na pipetovací techniky? Získejte tento užitečný plakát pro svou laboratoř ještě dnes! 

Pipetu se vzduchovým polštářem lze použít k pipetování mírně viskózních kapalin, včetně krve. Chcete-li dosáhnout maximální přesnosti, použijte výše popsanou techniku reverzního pipetování. Pro viskóznější kapaliny, jako je 85% glycerol nebo Triton X-100, nabízí pipeta s přímým posunutím nejlepší přesnost a konzistenci.

Mírně těkavé kapaliny, jako je ethanol, lze pipetovat pipetou se vzduchovým polštářem pomocí výše uvedené techniky reverzního pipetování. Pipety s přímým posunutím jsou však lepší volbou pro těkavé kapaliny. 

Pokud používáte pipetu se vzduchovým polštářem, před pipetováním objemu alespoň pětkrát předpropláchněte špičku pipety (odsajte a dávkujte). Tím se vzduch uvnitř pipety vyrovná a zpomalí se rychlost odpařování kapaliny. Rychlé odpařování těkavých kapalin rozšiřuje vzduch uvnitř pipety a vytlačuje kapalinu ze špičky, aniž by byl vyvíjen jakýkoli tlak na píst, což snižuje přesné dodávání objemu.

S těkavými kapalinami, jako je acetonitril, se obecně lépe manipuluje pomocí pipety s přímým posunutím.

Ano, pipetování pomocí pipet se vzduchovým polštářem může vytvářet aerosoly. Aerosoly mohou stoupat do vnitřku pipety a kontaminovat vnitřní stěny a píst. K aerosolizaci dochází snadněji, když je píst uvolněn příliš rychle během aspirace, a může k ní dojít také v opačném směru mimo pipetu s příliš rychlým dávkováním. 

Chcete-li minimalizovat aerosoly, nasávejte a dávkujte pomalu a rovnoměrně. Používejte filtrované tipy. 

Pipety s přímým posunutím používají špičky ve stylu stříkačky, které zabraňují aerosolizaci. Pipeta s přímým posunutím je nejlepší volbou pro pipetování nebezpečných kapalin a jakýchkoli kapalin se zvýšenou viskozitou nebo těkavostí.

Velmi studené nebo horké kapaliny mění tlak vzduchu v pipetách se vzduchovým polštářem, což vede k nepřesnému pipetování. 

Pipety s přímým posunutím se špičkami ve tvaru stříkačky, které nemají vzduchovou kapsu mezi kapalinou a pístem, nejsou ovlivněny různými teplotami kapalin. Pipety s přímým posunutím poskytují přesné výsledky s kapalinami bez pokojové teploty.

Pokud musíte pipetovat velmi horkou nebo studenou kapalinu pipetou se vzduchovým polštářem, neoplachujte špičku pipety předem – to je obvykle nejlepší postup pro dosažení nejvyšší přesnosti. Místo toho nasávejte a dávkujte rychle, abyste minimalizovali vliv teploty kapaliny na vnitřní vzduchovou mezeru pipety.

Abyste předešli tvorbě bublin a pěnění při pipetování, neponořujte špičku do nádržky na kapalinu více než 10 mm a pomalu odsávejte.

Reverzní pipetování nabízí dodatečnou ochranu, protože před odsáváním zcela stisknete píst na 2. doraz, takže není šance vstříknout vzduch do tekutého vzorku. Další informace o reverzním pipetování naleznete na této stránce. 

Pipeta s přímým posunutím nevytváří při interakci s kapalinou bubliny ani pěnu, protože její špička ve tvaru stříkačky nepředstavuje vzduch, se kterým by kapalina mohla interagovat.

Dekontaminujte pipetu otřením vlhkým hadříkem a čisticím prostředkem, jako je isopropanol nebo 10% roztok bělidla. Vyhněte se průhlednému plastovému okénku mikrometru.

Další možností může být autoklávování, ale zkontrolujte specifikace pipety. Pokud je autoklávovatelný, je autoklávován celý nástroj nebo pouze tekutý konec?  Často lze autoklávovat pouze tekutý konec.

Další informace o čištění pipety najdete v plakátu Čištění pipety A .

S reaktivními chemikáliemi je třeba zacházet opatrně. Používejte čerstvé inertní hroty a pravidelně stříkejte na vnější část pipety etanol, abyste odstranili postříkání a zbytky. Zabraňte kontaktu špičky s povrchy a často měňte pipetovací špičky, abyste zabránili křížovému kontaktu.

Pipety Rainin, které jsou všeobecně uznávány pro své bezpečné zapojení hrotu a hladké ovládání pístu, podporují bezpečné přenosy bez kontaminace, a to i při práci s náročnými reaktivními činidly.

Přesnost pipet – nebo přesnost, jak se jí nyní říká – je rozdíl mezi průměrným objemem všech měření (4–10 měření) a nastaveným objemem. Když se hovoří o přesnosti pipety, vysvětluje se to jako směrodatná odchylka všech provedených měření. 

Nejistota pipety je kvantitativní termín pro její celkovou přesnost. Je to kombinace pravdivosti (míra systematické chyby) a přesnosti (míra náhodné chyby). 

Rovnice pro nejistotu je: 

Nejistota = systematická chyba + náhodná chyba * k. k (faktor pokrytí nebo Z-skóre) závisí na počtu měření. k = 3,31 pro čtyři měření a 2 pro deset měření.

Chcete-li získat další informace o nejistotě pipet a zajištění přesnosti, stáhněte si tuto bílou knihu.