Calibração UV/VIS

Os espectrofotômetros UV/VIS Excellence são testados de acordo com os procedimentos definidos na Farmacopeia dos Estados Unidos (USP) 43 – NF 38 e na Farmacopeia Europeia (Ph. Eur.) Ed. 10. Os testes cobrem os seguintes parâmetros:

• Exatidão do comprimento de onda
• Exatidão fotométrica
• Repetibilidade fotométrica
• Linearidade fotométrica*
• Luz difusa
• Resolução

Além disso, parâmetros não exigidos pela USP ou pela Ph. Eur. também são testados:

• Repetibilidade do comprimento de onda
• Ruído fotométrico
• Nivelamento da linha de base
• Desvio fotométrico

A integralidade dos testes garante que todos os aspectos do desempenho dos espectrofotômetros sejam avaliados. Nossos espectrômetros UV7 Excellence cumprem os requisitos rigorosos descritos com mais detalhes abaixo.

*A linearidade fotométrica não é mais explicitamente mencionada na 43ª edição. A precisão fotométrica deve ser testada na faixa operacional pretendida. Portanto, a METTLER TOLEDO ainda recomenda o teste de linearidade fotométrica.

A precisão do comprimento de onda avalia a capacidade do instrumento de reproduzir fielmente comprimentos de onda. A medição da precisão do comprimento de onda permite determinar se estão presentes mudanças de desalinhamento do eixo do comprimento de onda.

Materiais de referência adequados para a determinação da precisão do comprimento de onda devem apresentar picos estreitos e bem definidos. Uma solução de óxido de hólmio é frequentemente usada para este propósito.

A USP e a Ph. Eur. definem diferentes critérios de aceitação, dependendo do material de referência utilizado e de sua faixa de comprimento de onda. Para materiais de referência líquida, aplicam-se os seguintes critérios:

USP: ±1 nm acima de 400 nm; ±2 nm acima de 400 nm
Ph. Eur.: ±1 nm acima de 400 nm; ±3 nm acima de 400 nm

Conforme a USP e Ph. Eur., a precisão do comprimento de onda, ou repetibilidade, não é necessária para espectrofotômetros baseados em matriz. Devido à ausência de parte móvel, os instrumentos baseados em matriz não estão sujeitos a desalinhamento entre medidas.

A precisão fotométrica é uma medida da capacidade do instrumento de medir corretamente a absorção e devolver valores de absorção o mais próximo possível do valor real.

A precisão fotométrica pode ser determinada medindo filtros sólidos ou líquidos de valores conhecidos de concentração e absorção e comparando a absorção medida com valores de referência.

Uma solução de 60 mg/L de dicromato de potássio (PDC) é usada para a faixa ultravioleta, enquanto um filtro de densidade neutra (ND) de 0,5 A cobre a faixa visível. Os critérios de aceitação são os mesmos para ambas as farmacopeias e são dependentes do nível de absorção do material de referência.

PDC: ±0,010 A abaixo de 1,0 A; ±1,0% (0.010*A) acima de 1,0 A
ND: ±0,008 A abaixo de 1,0 A; ±0,8% (0.008*A) acima de 1,0 A

Conforme a USP e a Ph. Eur., a precisão do comprimento de onda, ou repetibilidade, não é necessária para espectrofotômetros baseados em matriz. Devido à ausência de parte móvel, instrumentos baseados em matriz não estão sujeitos a desalinhamento entre medidas.

A repetibilidade fotométrica, também referida como precisão fotométrica pela USP, define a capacidade de um espectrofotômetro de devolver valores de absorção sobre múltiplas medidas de forma confiável e repetível.

São utilizados os mesmos materiais de referência utilizados para determinar a precisão fotométrica. Os filtros são medidos seis vezes e o desvio padrão sobre todas as medidas é calculado para avaliar a repetibilidade.

O desvio padrão não deve exceder 5 mA abaixo de 1 A ou 0,5% acima de 1 A, independentemente do material de referência usado ou da faixa de comprimento de onda.

Aviso: a repetibilidade fotométrica não é exigida pela Ph. Eur.

A linearidade fotométrica é uma medida da linearidade dos valores medidos (por exemplo, absorção) em função do aumento da concentração. Isso é especialmente importante para aplicações quantitativas.

A linearidade fotométrica pode ser determinada com os mesmos procedimentos e filtros usados para determinar a precisão fotométrica, entretanto, em três concentrações/filtros diferentes cobrindo a faixa entre 0 A e 2 A são usados.

A USP e a Ph. Eur. definem diferentes critérios de aceitação para a linearidade fotométrica:

Ph. Eur.: o coeficiente de correlação R2 deve exceder 0,999.
USP: os valores medidos em todas as concentrações/filtros devem preencher os critérios de precisão fotométrica.

A luz difusa ou dispersa é definida como luz que atinge o detector e que não faz parte da análise. Causa um viés no comprimento de onda correspondente, mas não se origina de uma contribuição da amostra medida. Portanto, a absorção da amostra é alterada por luz dispersa e os resultados da amostra incluem um erro sistemático.

A dispersão da luz é determinada medindo um filtro de corte (uma solução aquosa de cloreto de potássio) usando tanto o método específico de comprimento de onda (SWM) quanto o método de taxa de filtro de solução (SFRM).

Os critérios de aceitação definidos pela USP e pela Ph. Eur. para KCl são os seguintes:

SWM: Amáx ≥ 2,0 A
SFRM: Amáx ≥ 0,7 A

A resolução define o poder de resolução de um espectrofotômetro UV/Vis e sua capacidade de resolver estruturas adjacentes em um espectro.

A resolução é determinada medindo uma solução de Tolueno em n-Hexano. O mínimo e o máximo de absorção de um pico acentuado e bem resolvido são utilizados para a avaliação da resolução.

A USP define que a razão entre a absorção mínima e máxima nos respectivos comprimentos de onda de 267 e 269 nm deve exceder 1,3 para fornecer resolução suficiente, enquanto os critérios de aceitação da Ph. Eur. são definidos na monografia individual.

Ao contrário da varredura dos espectrofotômetros UV/Vis, os instrumentos baseados em matriz não possuem uma incisão física, que define mecanicamente a largura de banda espectral (SBW) do instrumento. A SBW equivalente de um instrumento de matriz pode ser calculada a partir da resolução do instrumento.
Por exemplo, a resolução do espectrofotômetro UV7 Excellence é ≥ 1,9 - o que corresponde a uma SBW ≤ 1,0 nm.

Os testes definidos acima podem ser realizados manualmente ou automaticamente, porém os métodos manuais têm o risco inerente de redução da precisão. Os fluxos de trabalho manuais são demorados e propensos a erros. A verificação automatizada de desempenho oferece os seguintes benefícios:

• Resultados mais rápidos com documentação rastreável e validação de resultados.
• A execução do fluxo de trabalho e erros de transcrição de dados podem ser evitados, os testes não precisam ser repetidos.
• Conformidade com padrões de integridade de dados. Este é um benefício significativo em relação ao gerenciamento de dados compatível com a FDA.
• Retorno rápido do investimento devido ao aumento da produtividade e segurança.

A conformidade regulatória é um objetivo fundamental para todos os fabricantes farmacêuticos e seus fornecedores. De acordo com a GMP, os processos de fabricação e métodos analíticos precisam ser validados, ao mesmo tempo em que os equipamentos utilizados para a produção e controle de qualidade exigem qualificação.

Para apoiar os Clientes no cumprimento desse requisito de conformidade, a METTLER TOLEDO oferece o EQPac para espectrofotômetros UV VIS Excellence. O EQPac é uma solução de serviço especificamente projetada para resolver preocupações de conformidade no ambiente regulatório exigente de hoje. Ele fornece um serviço de instalação e qualificação profissional no local, totalmente documentado, para garantir a conformidade normativa e a operação confiável.

Saiba mais sobre nosso serviço de qualificação de equipamentos e nosso serviço de calibração de espectrofotômetros UV/VIS.