Good Pipetting Practice: Bättre resultat genom utbildning och support

Vätskor med högt ångtryck kan orsaka snabba koncentrationsförändringar om de utsätts för luften för länge. Blöt spetsen i förväg, arbeta snabbt och håll behållarna täckta när det är möjligt. Konsekvent aspirationsteknik, inklusive möjligheten till omvänd pipettering, kan hjälpa till att stabilisera volymerna.

Eftersom pipetter med positiv förskjutning saknar luftspalt är de mer exakta med vätskor med högt ångtryck. Därför rekommenderas de om noggrannhet är avgörande för applikationen. 

Att välja rätt pipett innebär att utvärdera dina krav. Först, vilken typ av prover pipetterar du? Är de vattenhaltiga? Eller är de trögflytande, flyktiga, skummande, frätande eller farliga? För vattenhaltiga och nästan vattenhaltiga vätskor är de vanligaste luftförskjutningspipetterna (även kallade "luftkuddepipetter") ett bra val. För viskösa, flyktiga och andra ovanliga vätsketyper skulle en pipett med positiv förskjutning vara ett bättre val för både noggrannhet och säkerhet. 

Vilken volym kommer du att pipettera? Hur många prover behöver du överföra från ett kärl till ett annat? Kolla in detta white paper om val av pipett för att förstå vilken pipett som fungerar bäst beroende på vätskan och andra faktorer som är unika för din situation.

Mikrofluidiska analyser kräver kompromisslös noggrannhet. Stabilisera pipetteringshanden, använd spetsar av hög kvalitet som är utformade för ultralåga volymer och överväg omvänd pipettering för förbättrad konsistens. Regelbunden kalibrering, tillsammans med kontroll av miljöfaktorer som temperatur, stöder noggrannheten vid dessa skalor. 

Rainin-pipetter, i kombination med fint konstruerade spetsar med mikrovolym, erbjuder den exakta och tillförlitliga kontroll du behöver för att uppnå utmärkta resultat i banbrytande mikrofluidiska experiment.

Vid pipettering av tjocka lösningar med en flerkanalspipett introducerar luftbubblor volymfel och komplicerar mätningarna. För att minska risken för bubblor, förfukta spetsarna genom att aspirera och dosera långsamt 2-3 gånger. Aspirera sedan långsamt och se till att spetsarna är helt nedsänkta genom hela draget för att minska luftfickor. Omvänd pipettering kan ge ytterligare kontroll i bubbelbenägna prover. 

Eftersom pipetter med positiv förskjutning saknar luftspalt är det mindre sannolikt att bubblor påverkar deras noggrannhet. När du pipetterar många alikvoter av vätskor som bildar bubblor, kommer en elektronisk repeaterpipett som Nanorep att hjälpa till att undvika problem. Manuella pipetter med positiv förskjutning är också till hjälp vid experiment med lägre genomströmning där noggrannhet är viktig.

När du aspirerar, håll pipetten så nära vertikalt som möjligt och undvik vinklar som är större än 20° från Y-axeln. När du dispenserar, om du rör vid målkärlets vägg för att helt dra ut all vätska från spetsen, är det OK att överskrida 20°-vinkeln.

Forward pipetting är standardtekniken för pipettering och det bästa valet för vattenhaltiga prover. För viskösa och flyktiga prover ger omvänd pipettering bättre noggrannhet.

Vid forward pipettering, tryck ner kolven till första stoppet medan du håller pipetten utanför vätskan. Sänk sedan ner spetsen 2-10 mm djupt i vätskan du arbetar med – inte djupare. Släpp kolven långsamt till full förlängning för att aspirera hela vätskevolymen. För att dosera i ditt kärl, flytta pipetten in i kärlet och tryck sedan på kolven i jämn takt genom det första stoppet hela vägen till det andra stoppet – så långt som kolven går. Med kolven helt intryckt, dra lätt spetsen på pipetten upp längs kärlets vägg för att få med sista droppen. Detta hjälper till att helt fördela hela vätskevolymen. Släpp kolven, skjut ut pipettspetsen, ladda en ny pipettspets och upprepa.

För omvänd pipettering, tryck kolven hela vägen ner genom det första stoppet till det andra stoppet – så långt som kolven går. Sänk sedan ner spetsen i vätska och släpp långsamt och jämnt kolven för att suga. Flytta till det mottagande kärlet och tryck ENDAST PÅ KOLVEN TILL DET FÖRSTA STOPPET för att dosera rätt volym. En liten restvolym kommer att finnas kvar i pipettspetsen. Flytta pipetten över ett kasserat dispenseringskärl och tryck kolven resten av vägen ner till det andra stoppet, även kallat "blowout"-stoppet, för att frigöra eventuell kvarvarande vätska. 

Släpp kolven, skjut ut pipettspetsen, ladda en ny pipettspets och upprepa.

Vill du ha fler tips om pipetteringsteknik? Skaffa den här användbara affischen till ditt labb idag! 

En luftförskjutningspipett kan användas för att pipettera lätt trögflytande vätskor, inklusive blod. För att uppnå maximal noggrannhet, använd den omvända pipetteringstekniken som beskrivs ovan. För mer trögflytande vätskor, såsom 85 % glycerol eller Triton X-100, erbjuder en pipett med positiv förskjutning den bästa noggrannheten och konsistensen.

Lätt flyktiga vätskor som etanol kan pipetteras med en luftförskjutningspipett med hjälp av den ovan nämnda tekniken för omvänd pipettering. Pipetter med positiv förskjutning är dock ett bättre val för flyktiga vätskor. 

Om du använder en pipett med luftförskjutning, förskölj pipettspetsen (aspirera och dispensera) minst fem gånger innan du pipetterar volymen. Detta gör att luften inuti pipetten kommer i jämvikt, vilket bromsar vätskans avdunstningshastighet. Snabb avdunstning av flyktiga vätskor expanderar luften inuti en pipett och tvingar vätska från spetsen utan att något tryck läggs på kolven, och detta minskar den exakta volymleveransen.

Flyktiga vätskor som acetonitril hanteras i allmänhet bättre med en pipett med positiv förskjutning.

Ja, pipettering med luftförträngande pipetter kan skapa aerosoler. Aerosoler kan stiga upp i pipettens inre och förorena innerväggarna och kolven. Aerosolisering sker lättare när kolven släpps för snabbt under aspiration och kan också ske i motsatt riktning utanför pipetten med alltför snabb dispensering. 

För att minimera aerosoler, aspirera och dosera långsamt och jämnt. Använd filtrerade tips. 

Pipetter med positiv förskjutning använder sprutliknande spetsar som förhindrar aerosolisering. En pipett med positiv förskjutning är det bästa valet för pipettering av farliga vätskor och alla vätskor med förhöjd viskositet eller flyktighet.

Mycket kalla eller varma vätskor ändrar lufttrycket i luftförskjutningspipetter, vilket leder till felaktig pipettering. 

Pipetter med positiv förskjutning, med sprutliknande spetsar som inte har någon luftficka mellan vätska och kolv, påverkas inte av olika temperaturer på vätskor. Pipetter med positiv förskjutning ger exakta resultat med vätskor som inte har rumstemperatur.

Om du måste pipettera en mycket varm eller kall vätska med en pipett med luftförskjutning, skölj inte pipettspetsen i förväg – detta är vanligtvis den bästa metoden för högsta noggrannhet. Aspirera och dosera istället snabbt för att minimera effekten av vätskans temperatur på pipettens inre luftgap.

För att undvika bubblor och skumbildning vid pipettering, sänk inte ner spetsen mer än 10 mm i vätskebehållaren och aspirera långsamt.

Omvänd pipettering ger extra skydd eftersom du, innan du aspirerar, trycker ned kolven helt till det 2:a stoppet, så det finns ingen chans att injicera luft i vätskeprovet. Mer information om omvänd pipettering finns på den här sidan. 

En pipett med positiv förskjutning skapar inte bubblor eller skum när den interagerar med vätska eftersom dess sprutliknande spets inte presenterar luft för vätskan att interagera med.

Dekontaminera en pipett genom att torka av den med en våt trasa och ett rengöringsmedel som isopropanol eller en 10% blekmedelslösning. Undvik mikrometerns genomskinliga plastfönster.

Autoklavering kan vara ett annat alternativ, men kontrollera pipettens instrumentspecifikationer. Om den är autoklaverbar, är hela instrumentet autoklaverat eller bara den flytande änden?  Ofta kan endast den flytande änden autoklaveras.

Om du vill veta mer om hur du rengör en pipett kan du skaffa affischen Rengöra en pipett .

Reaktiva kemikalier måste hanteras med försiktighet. Använd färska, inerta spetsar och spraya pipettens utsida med etanol regelbundet för att ta bort stänk och rester. Förhindra att spetsen kommer i kontakt med ytor och byt pipettspetsar ofta för att förhindra korskontakt.

Rainin-pipetter är allmänt ansedda för sitt säkra spetsingrepp och sin smidiga kontroll över kolven, och stöder säkra, kontamineringsfria överföringar även när de arbetar med utmanande, reaktiva reagenser.

Pipettnoggrannhet – eller riktighet, som det kallas nu – är skillnaden mellan medelvolymen av alla mätningar (4-10 mätningar) och den inställda volymen. När man diskuterar precisionen hos en pipett förklaras detta som standardavvikelsen för alla mätningar som utförs. 

En pipetts osäkerhet är den kvantitativa termen för dess totala noggrannhet. Det är en kombination av riktighet (ett mått på systematiskt fel) och precision (ett mått på slumpmässigt fel). 

Ekvationen för osäkerhet är: 

Osäkerhet = Systematiskt fel + Slumpmässigt fel * k. k (täckningsfaktor eller Z-poäng) beror på antalet mätningar. k=3,31 för fyra mätningar och 2 för tio mätningar.

Om du vill ha mer information om pipettosäkerhet och säkerställande av noggrannhet kan du ladda ner detta white paper.