Good Pipetting Practice™: Bedre resultater gennem træning og støtte

Væsker med højt damptryk kan forårsage hurtige koncentrationsskift, hvis de udsættes for luften for længe. Fugt spidsen på forhånd, arbejd hurtigt, og hold beholderne lukkede, når det er muligt. Konsekvent aspirationsteknik, herunder muligheden for omvendt pipettering, kan hjælpe med at stabilisere volumener.

Fordi positive forskydningspipetter mangler en luftspalte, er de mere nøjagtige med væsker med et højt damptryk. Derfor anbefales de, hvis nøjagtighed er afgørende for applikationen. 

At vælge den rigtige pipette indebærer en evaluering af dine behov. For det første, hvilken slags prøver pipetterer du? Er de vandige? Eller er de tyktflydende, flygtige, skummende, ætsende eller farlige? Til vandige og næsten vandige væsker er de mest almindelige luftfortrængningspipetter (også kaldet "luftpude"-pipetter) et godt valg. For tyktflydende, flygtige og andre usædvanlige væsketyper ville en pipette med positiv forskydning være et bedre valg for både nøjagtighed og sikkerhed. 

Hvilken volumen vil du pipettere? Hvor mange prøver skal du overføre fra et fartøj til et andet? Se dette white paper om valg af pipetter for at forstå, hvilken pipette der fungerer bedst afhængigt af væsken og andre faktorer, der er unikke for din situation.

Mikrofluidiske analyser kræver kompromisløs nøjagtighed. Stabiliser din pipetteringshånd, brug spidser af høj kvalitet, der er designet til ultralave volumener, og overvej omvendt pipettering for at forbedre konsistensen. Regelmæssig kalibrering sammen med kontrol af miljøfaktorer som temperatur understøtter nøjagtighed på disse skalaer. 

Rainin-pipetter kombineret med fint konstruerede mikrovolumenspidser giver den præcise og pålidelige kontrol, du har brug for for at opnå fremragende resultater i banebrydende mikrofluidiske eksperimenter.

Ved pipettering af tykke opløsninger med en flerkanalspipette introducerer luftbobler volumenfejl og komplicerer målinger. For at reducere din risiko for bobler skal du forfugte spidserne ved at aspirere og dispensere langsomt 2-3 gange. Aspirer derefter langsomt, og sørg for, at spidserne er helt nedsænket under hele trækket for at reducere luftlommer. Omvendt pipettering kan give yderligere kontrol i bobleudsatte prøver. 

Fordi pipetter med positiv forskydning mangler en luftspalte, er bobler mindre tilbøjelige til at påvirke deres nøjagtighed. Ved pipettering af mange alikvoter af væsker, der danner bobler, vil en elektronisk repeaterpipette som Nanorep hjælpe med at undgå problemer. Manuelle positive forskydningspipetter er også nyttige i eksperimenter med lavere gennemstrømning, hvor nøjagtighed er vigtig.

Når du aspirerer, skal du holde en pipette så tæt på lodret som muligt, og undgå enhver vinkel, der er større end 20° fra Y-aksen. Når du dispenserer, hvis du rører ved væggen af målbeholderen for helt at trække al væske helt ud af spidsen, er det OK at overskride vinklen på 20°.

Fremadrettet pipettering er standardpipetteringsteknikken og det bedste valg til vandige prøver. For viskøse og flygtige prøver giver omvendt pipettering bedre nøjagtighed.

For at skubbe pipetten fremad skal du skubbe stemplet ned til det første stop, mens du holder pipetten uden for væsken. Nedsænk derefter spidsen 2-10 mm dybt ned i den væske, du arbejder med – ikke dybere. Slip stemplet langsomt til fuld forlængelse for at aspirere hele væskevolumenet. For at dispensere i din målbeholder skal du flytte pipetten ind i beholderen og derefter trykke stemplet med en jævn hastighed gennem det første stop hele vejen til det andet stop – så langt stemplet rækker. Når stemplet er trykket helt ned, skal du let trække spidsen af pipetten op ad beholderens væg for at "røre ved". Dette hjælper med at dispensere det fulde væskevolumen fuldstændigt. Slip stemplet, skub pipettespidsen ud, isæt en ny pipettespids, og gentag.

For at vende pipetten skal du skubbe stemplet helt ned gennem det første stop til det andet stop – så langt som stemplet rækker. Nedsænk derefter spidsen i væske og slip langsomt og jævnt stemplet for at aspirere. Flyt til modtagerbeholderen, og tryk KUN PÅ STEMPLET til første stop for at dispensere den korrekte volumen. Der vil være et lille restvolumen tilbage i pipettespidsen. Flyt pipetten over en kasseringsbeholder, og tryk stemplet resten af vejen ned til det andet stop, også kaldet "blowout"-stop, for at frigive eventuel resterende væske. 

Slip stemplet, skub pipettespidsen ud, isæt en ny pipettespids, og gentag.

Leder du efter flere tips om pipetteringsteknikker? Få denne nyttige plakat til dit laboratorium i dag! 

En luftfortrængningspipette kan bruges til at pipettere let tyktflydende væsker, herunder blod. For at opnå maksimal nøjagtighed skal du bruge den omvendte pipetteringsteknik beskrevet ovenfor. Til mere tyktflydende væsker, såsom 85 % glycerol eller Triton X-100, giver en pipette med positiv forskydning den bedste nøjagtighed og konsistens.

Let flygtige væsker såsom ethanol kan pipetteres med en luftfortrængningspipette ved hjælp af ovennævnte omvendte pipetteringsteknik. Pipetter med positiv forskydning er dog et bedre valg til flygtige væsker. 

Hvis du bruger en luftfortrængningspipette, skal du forskylle pipettespidsen (aspirere og dispensere) mindst fem gange, før du pipetterer din lydstyrke. Dette afbalancerer luften inde i pipetten og sænker væskens fordampningshastighed. Hurtig fordampning af flygtige væsker udvider luften inde i en pipette og tvinger væske ud af spidsen uden at der lægges tryk på stemplet, og dette mindsker nøjagtig volumentilførsel.

Flygtige væsker såsom acetonitril håndteres generelt bedre med en positiv fortrængningspipette.

Ja, pipettering med luftfortrængningspipetter kan skabe aerosoler. Aerosoler kan stige ind i pipettens indre og forurene de indvendige vægge og stemplet. Aerosolisering sker lettere, når stemplet frigives for hurtigt under aspiration og kan også forekomme i den modsatte retning uden for pipetten med for hurtig dispensering. 

For at minimere aerosoler skal du aspirere og dispensere langsomt og jævnt. Brug filtrerede spidser. 

Pipetter med positiv forskydning bruger sprøjtestilspidser, der forhindrer aerosolisering. En pipette med positiv forskydning er det bedste valg til pipettering af farlige væsker og enhver væske med forhøjet viskositet eller flygtighed.

Meget kolde eller varme væsker ændrer lufttrykket i luftfortrængningspipetter, hvilket fører til unøjagtig pipettering. 

Pipetter med positiv forskydning med sprøjtespidser, der ikke har nogen luftlomme mellem væske og stempel, påvirkes ikke af forskellige temperaturer på væsker. Pipetter med positiv forskydning giver nøjagtige resultater med væsker uden stuetemperatur.

Hvis du skal pipettere en meget varm eller kold væske med en luftfortrængningspipette, skal du ikke skylle pipettespidsen på forhånd – dette er typisk den bedste praksis for den højeste nøjagtighed. I stedet skal du aspirere og dispensere hurtigt for at minimere effekten af væskens temperatur på pipettens indvendige luftspalte.

For at undgå bobler og skumdannelse ved pipettering må spidsen ikke nedsænkes mere end 10 mm i væskebeholderen, og aspirere langsomt.

Omvendt pipettering giver ekstra beskyttelse, fordi du, før aspiration, trykker stemplet helt til 2. stop, så der ikke er nogen chance for at sprøjte luft ind i væskeprøven. Du kan få mere at vide om omvendt pipettering på denne side. 

En pipette med positiv forskydning skaber ikke bobler eller skum, når den interagerer med væske, fordi dens sprøjtelignende spids ikke præsenterer luft, som væsken kan interagere med.

Dekontaminer en pipette ved at tørre den af med en våd klud og et rengøringsmiddel som isopropanol eller en 10% blegemiddelopløsning. Undgå mikrometerets klare plastvindue.

Autoklavering kan være en anden mulighed, men tjek din pipettes instrumentspecifikationer. Hvis det er autoklaverbart, er hele instrumentet autoklaveret eller kun den flydende ende?  Ofte er det kun den flydende ende, der kan autoklaveres.

Du kan få mere at vide om rengøring af en pipette på plakaten Rengøring af en pipette .

Reaktive kemikalier skal håndteres med forsigtighed. Brug friske, inaktive spidser, og sprøjt pipettens yderside med ethanol regelmæssigt for at fjerne stænk og rester. Undgå spidskontakt med overflader, og skift pipettespidser ofte for at forhindre krydskontakt.

Rainin-pipetter, der er bredt anerkendt for deres sikre spidsindgreb og jævne stempelkontrol, understøtter sikre, kontamineringsfri overførsler, selv når der arbejdes med udfordrende, reaktive reagenser.

Pipettenøjagtighed – eller ægthed, som det hedder nu – er forskellen mellem det gennemsnitlige volumen af alle målinger (4-10 målinger) og det indstillede volumen. Når man diskuterer præcisionen af en pipette, forklares dette som standardafvigelsen for alle udførte målinger. 

En pipettes usikkerhed er den kvantitative betegnelse for dens samlede nøjagtighed. Det er en kombination af sandhed (et mål for systematiske fejl) og præcision (et mål for tilfældige fejl). 

Ligningen for usikkerhed er: 

Usikkerhed = Systematisk fejl + Tilfældig fejl * k. k (dækningsfaktor eller Z-score) afhænger af antallet af målinger. K=3,31 for fire målinger og 2 for ti målinger.

Du kan få flere oplysninger om pipetteusikkerhed og sikring af nøjagtighed ved at downloade dette white paper.