Migliora i tuoi risultati con le buone pratiche di pipettaggio

I liquidi ad alta pressione di vapore possono causare rapidi spostamenti di concentrazione se esposti all'aria per troppo tempo. Pre-bagnare la punta, lavorare rapidamente e tenere i contenitori tappati quando possibile. Una tecnica di aspirazione coerente, compresa l'opzione del pipettaggio inverso, può aiutare a stabilizzare i volumi.

Poiché le pipette a spostamento positivo sono prive di un traferro, sono più accurate con liquidi con un'elevata pressione di vapore. Pertanto, sono consigliati se la precisione è vitale per l'applicazione. 

La scelta della pipetta giusta implica la valutazione delle vostre esigenze. Innanzitutto, che tipo di campioni state pipettando? Sono acquosi? Oppure sono viscosi, volatili, schiumogeni, corrosivi o pericolosi? Per liquidi acquosi e quasi acquosi, le pipette a spostamento d'aria più comuni (chiamate anche pipette "a cuscino d'aria") sono una buona scelta. Per liquidi viscosi, volatili e altri tipi insoliti, una pipetta a spostamento positivo sarebbe una scelta migliore sia per l'accuratezza che per la sicurezza. 

Quale volume pipettate? Quanti campioni sono necessari per trasferire da un recipiente all'altro? Dai un'occhiata a questo white paper sulla scelta delle pipette per capire quale pipetta funziona meglio a seconda del liquido e di altri fattori unici per la tua situazione.

I saggi microfluidici richiedono un'accuratezza senza compromessi. Stabilizzate la mano per il pipettaggio, utilizzate puntali di alta qualità progettati per volumi estremamente bassi e prendete in considerazione il pipettaggio inverso per una maggiore consistenza. La taratura regolare, insieme al controllo di fattori ambientali come la temperatura, supporta l'accuratezza su queste scale. 

Le pipette Rainin, abbinate a puntali per microvolumi finemente progettati, offrono il controllo preciso e affidabile necessario per ottenere risultati eccellenti in esperimenti microfluidici all'avanguardia.

Quando si pipettano soluzioni dense con una pipetta multicanale, le bolle d'aria introducono errori di volume e complicano le misurazioni. Per ridurre il rischio di bolle, pre-bagnare le punte aspirando ed erogando lentamente 2-3 volte. Quindi, aspirare lentamente, assicurandosi che le punte siano completamente immerse durante l'estrazione per ridurre le sacche d'aria. Il pipettaggio inverso può fornire un controllo aggiuntivo nei campioni soggetti a bolle. 

Poiché le pipette a spostamento positivo sono prive di un traferro, è meno probabile che le bolle influiscano sulla loro precisione. Quando si pipettano molte aliquote di liquidi che formano bolle, una pipetta elettronica a ripetizione come Nanorep aiuterà a evitare problemi. Le pipette manuali a spostamento positivo sono utili anche per gli esperimenti a bassa produttività, in cui l'accuratezza è importante.

Durante l'aspirazione, tenere la pipetta il più vicino possibile alla verticale, evitando qualsiasi angolo superiore a 20° rispetto all'asse Y. Durante l'erogazione, se si tocca la parete del recipiente di destinazione per estrarre completamente tutto il liquido dalla punta, è possibile superare l'angolo di 20°.

Il pipettaggio diretto è la tecnica di pipettaggio standard e la scelta migliore per i campioni acquosi. Per i campioni viscosi e volatili, il pipettaggio inverso offre una migliore precisione.

Per far avanzare la pipetta, spingere lo stantuffo verso il basso fino al primo arresto tenendo la pipetta all'esterno del liquido. Quindi, immergi la punta a 2-10 mm di profondità nel liquido con cui stai lavorando, non più in profondità. Rilasciare lentamente lo stantuffo fino alla massima estensione per aspirare l'intero volume del liquido. Per erogare nel recipiente di destinazione, spostare la pipetta nel recipiente, quindi premere lo stantuffo a una velocità uniforme attraverso il primo arresto fino al secondo arresto, fino all'arresto dello stantuffo. Con lo stantuffo completamente premuto, trascinare leggermente la punta della pipetta lungo la parete del recipiente per "toccare". Questo aiuta a erogare completamente l'intero volume del liquido. Rilasciare lo stantuffo, espellere il puntale della pipetta, caricare un nuovo puntale della pipetta e ripetere.

Per invertire la pipetta, spingere lo stantuffo fino in fondo attraverso il primo arresto fino al secondo arresto, fino all'arresto dello stantuffo. Quindi, immergere la punta nel liquido e rilasciare lentamente e uniformemente lo stantuffo per aspirare. Passare al recipiente ricevente e premere lo stantuffo SOLO FINO AL PRIMO ARRESTO per erogare il volume corretto. Un piccolo volume residuo rimarrà nel puntale della pipetta. Spostare la pipetta su un recipiente di erogazione e premere lo stantuffo fino al secondo arresto, chiamato anche arresto di "scoppio", per rilasciare il liquido rimanente. 

Rilasciare lo stantuffo, espellere il puntale della pipetta, caricare un nuovo puntale della pipetta e ripetere.

Cercate altri suggerimenti sulle tecniche di pipettaggio? Scaricate oggi stesso questo utile poster per il vostro laboratorio! 

Una pipetta a spostamento d'aria può essere utilizzata per pipettare liquidi leggermente viscosi, compreso il sangue. Per ottenere la massima precisione, utilizzare la tecnica di pipettaggio inverso descritta sopra. Per liquidi più viscosi, come il glicerolo all'85% o il Triton X-100, una pipetta a spostamento positivo offre la migliore precisione e consistenza.

I liquidi leggermente volatili come l'etanolo possono essere pipettati con una pipetta a spostamento d'aria utilizzando la tecnica di pipettaggio inverso sopra menzionata. Tuttavia, le pipette a spostamento positivo sono una scelta migliore per i liquidi volatili. 

Se si utilizza una pipetta a spostamento d'aria, presciacquare il puntale della pipetta (aspirare ed erogare) almeno cinque volte prima di pipettare il volume. In questo modo si equilibra l'aria all'interno della pipetta, rallentando la velocità di evaporazione del liquido. La rapida evaporazione dei liquidi volatili espande l'aria all'interno di una pipetta e spinge il liquido fuori dal puntale senza esercitare alcuna pressione sullo stantuffo, riducendo così l'erogazione accurata del volume.

I liquidi volatili come l'acetonitrile sono generalmente gestiti meglio con una pipetta a spostamento positivo.

Sì, il pipettaggio con pipette a spostamento d'aria può creare aerosol. Gli aerosol possono salire all'interno della pipetta e contaminare le pareti interne e il pistone. L'aerosolizzazione si verifica più facilmente quando lo stantuffo viene rilasciato troppo rapidamente durante l'aspirazione e può avvenire anche nella direzione opposta all'esterno della pipetta con un'erogazione troppo rapida. 

Per ridurre al minimo gli aerosol, aspirare ed erogare lentamente e in modo uniforme. Usa punte filtrate. 

Le pipette a spostamento positivo utilizzano puntali a siringa che impediscono l'aerosolizzazione. Una pipetta a spostamento positivo è la scelta migliore per il pipettaggio di liquidi pericolosi e di qualsiasi liquido con elevata viscosità o volatilità.

Liquidi molto freddi o caldi modificano la pressione dell'aria all'interno delle pipette a spostamento d'aria, causando un pipettaggio impreciso. 

Le pipette a spostamento positivo, con puntali a siringa che non hanno sacche d'aria tra il liquido e il pistone, non sono influenzate dalle diverse temperature dei liquidi. Le pipette a spostamento positivo forniscono risultati accurati con liquidi non a temperatura ambiente.

Se è necessario pipettare un liquido molto caldo o freddo con una pipetta a spostamento d'aria, non risciacquare preventivamente il puntale della pipetta: questa è in genere la migliore pratica per la massima precisione. Invece, aspirare ed erogare rapidamente per ridurre al minimo l'effetto della temperatura del liquido sul traferro interno della pipetta.

Per evitare bolle e formazione di schiuma durante il pipettaggio, non immergere il puntale per più di 10 mm nel serbatoio del liquido e aspirare lentamente.

Il pipettaggio inverso offre una protezione aggiuntiva perché, prima dell'aspirazione, si preme completamente lo stantuffo fino al 2° arresto, in modo che non vi sia alcuna possibilità di iniettare aria nel campione liquido. Per ulteriori informazioni sul pipettaggio inverso, visitare questa pagina. 

Una pipetta a spostamento positivo non crea bolle o schiuma quando interagisce con il liquido perché la sua punta a siringa non presenta aria con cui il liquido possa interagire.

Decontamina una pipetta strofinandola con un panno umido e un detergente come l'isopropanolo o una soluzione di candeggina al 10%. Evita la finestra di plastica trasparente del micrometro.

L'autoclave può essere un'altra opzione, ma controllate le specifiche dello strumento della vostra pipetta. Se è autoclavabile, l'intero strumento è autoclavato o solo l'estremità liquida?  Spesso, solo l'estremità liquida può essere sterilizzata in autoclave.

Per ulteriori informazioni sulla pulizia di una pipetta, consulta il poster Pulizia di una pipetta .

Le sostanze chimiche reattive devono essere maneggiate con cura. Utilizzare puntali freschi e inerti e spruzzare regolarmente l'esterno della pipetta con etanolo per rimuovere schizzi e residui. Evitare il contatto del puntale con le superfici e cambiare frequentemente i puntali della pipetta per evitare il contatto incrociato.

Ampiamente apprezzate per l'innesto sicuro del puntale e il controllo fluido dello stantuffo, le pipette Rainin supportano trasferimenti sicuri e privi di contaminazione, anche quando si lavora con reagenti reattivi e impegnativi.

L'accuratezza delle pipette, o esattezza, come viene chiamata ora, è la differenza tra il volume medio di tutte le misurazioni (4-10 misurazioni) e il volume impostato. Quando si parla della precisione di una pipetta, questa viene spiegata come la deviazione standard di tutte le misurazioni eseguite. 

L'incertezza di una pipetta è il termine quantitativo che indica la sua accuratezza complessiva. È una combinazione di esattezza (una misura dell'errore sistematico) e precisione (una misura dell'errore casuale). 

L'equazione per l'incertezza è: 

Incertezza = Errore sistematico + Errore casuale * k. k (fattore di copertura o Z-score) dipende dal numero di misurazioni. k=3,31 per quattro misurazioni e 2 per dieci misurazioni.

Per ulteriori informazioni sull'incertezza delle pipette e sulla garanzia dell'accuratezza, scarica questo libro bianco.