Os meios de cultura, também conhecidos como meios de crescimento, são misturas específicas de nutrientes e outras substâncias que auxiliam no crescimento de microrganismos como bactérias e fungos (leveduras e bolores). Os meios de cultura são usados para testes de controle de qualidade de matérias-primas não estéreis e produtos acabados, bem como para testes de contaminação microbiana (esterilidade) em aplicações como monitoramento de higiene, validação do processo de esterilização e determinação da eficácia de conservantes e agentes antimicrobianos.
Os testes de enumeração microbiana para produtos não estéreis são realizados de acordo com os procedimentos de teste harmonizados das farmacopeias europeia, americana e japonesa. Esses testes, anteriormente conhecidos como Testes de Limite Microbiano (MLT), determinam a carga biológica da amostra do produto. Isso é obtido contando o número de unidades formadoras de colônias que cresceram nos meios de cultura para um tamanho de amostra conhecido (UFC/g). Os critérios de aceitação são baseados na Contagem Microbiana Aeróbica Total (TAMC), na Contagem Total de Leveduras e Bolores (TYMC). Além disso, são realizados testes específicos para confirmar a presença ou ausência de certos microrganismos que podem revelar-se censuráveis.
Os ingredientes dos meios de cultura variam de acordo com o teste a ser realizado e o microrganismo de interesse. Mais comumente, os meios de cultura são baseados em um caldo nutriente (líquido), muitas vezes misturado com ágar e preparado em placas de Petri (podem ser semi-sólidos ou sólidos). Para meios enriquecidos ou seletivos, outros componentes específicos são adicionados.
A preparação dos meios de cultura deve ser realizada com precisão para garantir que o crescimento microbiológico seja promovido corretamente. Os ingredientes individuais dos meios de cultura (pós, géis e líquidos) devem ser cuidadosamente pesados de acordo com a receita de formulação do meio de cultura. Uma balança de precisão com resolução de 1 mg a 10 mg é normalmente usada para os componentes principais. Uma balança analítica pode ser necessária para pesar oligoelementos, como cobre e zinco. Se for necessária uma quantidade menor de meios de cultura, deve-se tomar cuidado para recalcular corretamente as quantidades de ingredientes e uma balança com maior legibilidade pode ser necessária para atender aos requisitos de precisão.
A preparação precisa dos meios de cultura é essencial para garantir que o crescimento microbiológico seja corretamente suportado. Assista ao vídeo para ver como as balanças de precisão XPR da METTLER TOLEDO não apenas ajudam a garantir que seus meios de crescimento sejam formulados com precisão, mas também simplificam o processo para economizar tempo e esforço.
A preparação de formulações de meios de cultura, incluindo meios de crescimento líquidos e meios de cultura à base de ágar nutriente, é um procedimento comum em qualquer laboratório de microbiologia. O processo de formulação de meios de cultura envolve muitas etapas e deve ser realizado com cuidado para evitar a contaminação cruzada e, em última análise, proteger a saúde dos consumidores.
Dependendo do tipo de produto e sua finalidade, existem três categorias principais de testes de controle de qualidade microbiana que requerem o uso de meios de crescimento:
| Tipo de produto | Teste | Propósito |
|---|---|---|
| Não estéril | Testes de enumeração microbiana | Conta o número total de bactérias e/ou fungos em uma amostra de produto |
| Não estéril | Testes para organismos específicos | Identifica organismos censuráveis, como Salmonella, em uma amostra de produto |
| Estéril | Testes de esterilidade | Verifica a esterilidade de uma amostra de produto |
Os procedimentos de teste de limites microbianos são realizados para determinar se um produto não estéril está em conformidade com as especificações fornecidas para a qualidade microbiana. Esses produtos não estéreis incluem produtos cosméticos, de saúde e farmacêuticos que podem ser ingeridos, aplicados topicamente ou inalados. A eficácia de tais produtos pode ser afetada ou mesmo eliminada pela presença de certos microrganismos e, além disso, alguns microrganismos podem afetar adversamente a saúde do consumidor. Os testes de enumeração microbiana são uma série de testes que os fabricantes podem usar para ajudar a garantir que a carga biológica de seus produtos acabados permaneça dentro dos limites seguros.
Embora muitos países tenham suas próprias diretrizes para estabelecer a segurança de produtos não estéreis, há harmonização dos padrões importantes nos mercados europeu, americano e japonês, conforme mostrado na tabela abaixo.
| Farmacopeia Europeia (EP) | Farmacopeia dos EUA (USP) | Farmacopeia Japonesa (JP) |
|---|---|---|
| 2.6.12: Exame Microbiano de Produtos Não Estéreis: Testes de Enumeração Microbiana | <61>: Exame microbiano de produtos não estéreis: Testes de enumeração microbiana | 4.05 I: Exame Microbiano de Produtos Não Estéreis: Testes de Enumeração Microbiana |
| 2.6.13: Exame microbiano de produtos não estéreis: testes para microrganismos especificados | <62>: Exame microbiano de produtos não estéreis: testes para microrganismos especificados | 4.05 II: Exame Microbiano de Produtos Não Estéreis: Testes para Microrganismos Especificados |
| 5.1.4: Qualidade microbiológica de preparações farmacêuticas não estéreis e substâncias para uso farmacêutico | <1111>: Exame microbiológico de produtos não estéreis: Critérios de aceitação de preparações farmacêuticas e substâncias para uso farmacêutico | 12: Exame microbiológico de produtos não estéreis: Critérios de aceitação de preparações farmacêuticas e substâncias para uso farmacêutico |
Os testes de esterilidade confirmam que os produtos estão livres da presença de microrganismos viáveis e são de vital importância para dispositivos médicos, produtos farmacêuticos, tecidos e quaisquer outros materiais que afirmem ser estéreis ou livres de microrganismos viáveis. Além de identificar a contaminação potencial, o teste de esterilidade também é usado para determinar a eficácia antimicrobiana e validar os procedimentos de esterilização.
| Farmacopeia Europeia (EP) | Farmacopeia dos EUA (USP) | Farmacopeia Japonesa (JP) |
|---|---|---|
| 2.6.1: Esterilidade | <71>: Testes de esterilidade | 4.06: Teste de esterilidade |
As soluções tampão são de vital importância em uma ampla gama de aplicações. No entanto, a preparação do tampão é demorada e trabalhosa e deve ser feita com cuidado para evitar erros. Se você precisar de suporte com a preparação do buffer ou quiser conselhos sobre qual balança atende aos seus requisitos de precisão, nossa equipe de especialistas está aqui para ajudá-lo. Não hesite em contactar-nos para obter ajuda ou aconselhamento.
Os meios de cultura e os meios de crescimento geralmente consistem em mais de cinco ingredientes, às vezes até 30. Esses processos de formulação complexos exigem muito cuidado e atenção, e mesmo o técnico de laboratório mais rápido pode precisar de 1,5 h para preparar essa mistura.
Cálculos de meios de cultura
A receita típica de meio de cultura produz 1 litro de solução de meio de cultura. Quando é necessário um volume diferente de 1 litro, é necessário recalcular todas as quantidades de ingredientes de acordo e registrar todos os novos valores. Qualquer erro nos cálculos ou no registro dos novos valores pode resultar em um meio de cultura que não funciona conforme necessário, potencialmente levando a consequências graves.
Pesagem e registro de resultados de peso
Ao seguir uma receita de meio de cultura ou os valores recalculados, o técnico de laboratório deve ter certeza de que a quantidade certa de cada ingrediente é usada e, de fato, que todos os ingredientes foram realmente adicionados. Isso geralmente pode significar marcar os ingredientes de uma lista à medida que são pesados. Deve-se tomar cuidado para evitar erros de transcrição ao registrar os pesos reais ou ao transferi-los para um computador. O uso de duas balanças no processo de preparação do meio de cultura aumenta a complexidade, reduz a eficiência e aumenta o risco de erros.
Influências de pesagem
Os ingredientes dos meios de cultura podem ser pesados em uma variedade de recipientes diferentes, desde barcos de pesagem até béqueres de cinco litros. Todos os recipientes, bem como a própria balança, podem estar sujeitos a influências externas, por exemplo, movimento do ar, cargas eletrostáticas ou o campo magnético de um agitador, o que pode dar origem a dificuldades como tara da balança, leituras flutuantes e instáveis e tempos de estabilização mais longos. Tais desafios estendem o tempo de fabricação dos meios de cultura, afetando a produtividade.
As dificuldades de pesagem em uma cabine de segurança ou capela de exaustão
Os efeitos do movimento do ar dentro de um gabinete de segurança ou capela de exaustão podem ser aliviados através do uso de um protetor de vento para proteger a balança e o recipiente. Embora um protetor de vento seja uma excelente maneira de evitar erros de pesagem, existem algumas desvantagens práticas:
Documentação
Não apenas os meios de cultura devem ser totalmente rotulados para evitar confusões, mas todos os dados relacionados aos meios de cultura devem ser registrados e armazenados com segurança para referência e rastreabilidade futuras. Lidar com grandes quantidades de dados manualmente é demorado e acarreta um alto risco de erro.
As balanças de precisão XPR da METTLER TOLEDO oferecem um alto nível de precisão e abordam muitos dos desafios da preparação de meios de cultura, simplificando processos e reduzindo a carga de trabalho dos técnicos de laboratório. Com resolução de 0,1 mg a 100 mg e capacidade de até 10 kg, as balanças de precisão XPR são perfeitas para uma ampla gama de aplicações de preparação de meios de cultura.
Receitas diretamente na balança
Até 50 receitas de preparação de meios de cultura podem ser salvas na balança como métodos de pesagem, permitindo que os técnicos acessem rapidamente a receita necessária e comecem a trabalhar. Instruções passo a passo são fornecidas no visor da balança para que seja fácil para os técnicos acompanharem onde estão no processo de preparação do meio de cultura.
Cálculos automáticos e armazenamento de resultados
No início da receita do meio de cultura, o técnico simplesmente insere o volume necessário e as quantidades dos ingredientes são recalculadas automaticamente. A balança solicita que o técnico pese cada ingrediente, salva o resultado real do peso e o joio automaticamente antes que o próximo ingrediente seja adicionado. Não há necessidade de registrar os resultados manualmente e os resultados podem ser impressos automaticamente no final.
Não é necessário protetor de vento
Todas as balanças de precisão XPR são equipadas com o prato de pesagem SmartPan™. O SmartPan oferece estabilidade extraordinária, minimizando os efeitos das correntes de ar na célula de pesagem, tornando possível pesar com resolução de 1 mg sem protetor de vento. O SmartPan permite que os resultados sejam entregues até duas vezes mais rápido que um prato de pesagem padrão.
Limpeza fácil
Equipamentos limpos são essenciais para reduzir o risco de contaminação cruzada. O prato de pesagem SmartPan retém quaisquer derramamentos na base do prato, permitindo o descarte seguro. A panela e a base são facilmente removidas para limpeza na máquina de lavar louça. Uma capa protetora no corpo não apenas protege a balança, ajudando a evitar que derramamentos entrem na célula de pesagem, mas a superfície lisa é fácil de limpar e evita o acúmulo de sujeira. Tampas quimicamente resistentes estão disponíveis para o display da balança que podem ser simplesmente levantadas após o uso e descartadas para evitar contaminação cruzada.
As balanças de precisão XPR da METTLER TOLEDO podem ser conectadas ao nosso software de laboratório LabX proprietário para criar uma solução de fluxo de trabalho completa que oferece recursos abrangentes de gerenciamento de dados. Um banco de dados centralizado fornece a todos os usuários conectados acesso aos mesmos POPs para preparação de meios de cultura, garantindo que cada técnico siga os mesmos procedimentos. O software cuida de todas as informações e cálculos do processo automaticamente. Os resultados são salvos com segurança no banco de dados e podem ser acessados a qualquer momento para análise posterior e geração de relatórios. O software praticamente elimina a necessidade de gravação manual de dados – até mesmo etiquetas detalhadas podem ser impressas automaticamente.
A solução pode ser integrada aos sistemas ERP/LIMS existentes, permitindo a transferência bidirecional de receitas e resultados. Instrumentos, tarefas e usuários podem ser gerenciados centralmente; Os gerentes de laboratório podem monitorar o progresso das tarefas ao vivo sem a necessidade de estar presente no laboratório. Para ambientes altamente regulamentados, o software ajuda na conformidade com os requisitos de integridade de dados ALCOA+ da FDA.
Se você precisa apenas de medições de pH rápidas e confiáveis ou deve cumprir regulamentos rigorosos, a METTLER TOLEDO pode ajudá-lo.
A linha topo de linha SevenExcellence oferece operação intuitiva com tela sensível ao toque OneClick™, permitindo que os métodos salvos sejam iniciados diretamente de um atalho na tela inicial. O gerenciamento inteligente do sensor garante que seus eletrodos de pH estejam sempre nas melhores condições para resultados precisos. A linha Seven Excellence pode ser conectada ao LabX para garantir a rastreabilidade e a integridade dos dados.
Para medições de pH em superfícies planas, como placas de ágar, são recomendados eletrodos de superfície especializados, como o InLab Surface Pro-ISM .
Você já desejou que os processos de pesagem e documentação para a formulação de meios fossem menos complicados? Você conhece o desafio de reproduzir a formulação de mídia otimizada? Leia nosso guia e saiba como instrumentos, software e acessórios personalizados podem ajudar os laboratórios de P&D a alcançar um alto grau de confiabilidade de pesagem, consistência de meios, custo-benefício geral e qualidade do produto para seus processos de formulação.
Para evitar o risco de erros, a melhor maneira de recalcular os erros é eletronicamente. Se as quantidades da receita estiverem disponíveis em uma planilha, os novos valores poderão ser calculados rapidamente. Ao usar uma balança de precisão XPR, você pode configurar seu método de formulação de meios de cultura para solicitar que você insira o volume necessário e as quantidades desejadas serão calculadas automaticamente. O saldo solicitará os valores necessários.
As tolerâncias de pesagem devem ser definidas em seu POP de preparação de meios de cultura. Eles podem ser especificados com precisão ou dados como uma porcentagem. Se você precisar alterar o volume da receita, há o desafio adicional de também recalcular os limites de peso superior e inferior relacionados às tolerâncias. Com as balanças de precisão XPR, as tolerâncias são incluídas como uma porcentagem quando a receita do meio de cultura é criada. Os limites de peso superior e inferior são calculados automaticamente para qualquer volume alvo. O guia de pesagem integrado ajuda você a dosar de acordo com o alvo, exibindo verde se você estiver dentro da faixa de tolerância.
A maneira mais simples é organizar os ingredientes do meio de cultura de acordo com a lista e marcá-los um por um à medida que os adiciona. No entanto, esse processo deve ser realizado com diligência para evitar erros. Ao salvar seu SOP de meio de cultura como um método em sua balança XPR, a balança solicitará cada ingrediente por nome e com a quantidade necessária. Depois de pesar o ingrediente, o resultado do peso e o nome do ingrediente são salvos automaticamente no protocolo de resultados integrado, que você pode visualizar a qualquer momento. O equilíbrio joia automaticamente e solicita o próximo ingrediente.
Em nossas balanças XPR, os pesos dos ingredientes do meio de cultura são salvos automaticamente no protocolo de resultados integrado e podem ser visualizados a qualquer momento. Os resultados finais podem ser impressos ou transferidos para um PC.
O melhor equilíbrio depende da sua aplicação e dos seus requisitos de precisão. Ao escolher seu saldo, você precisa considerar:
Em termos metrológicos, essas considerações são necessárias para definir o requisito de peso mínimo, a capacidade da balança e a faixa de pesagem segura. O serviço gratuito de Recomendação GWP® da METTLER TOLEDO ajuda você a escolher a balança certa para suas necessidades e determina se a balança existente é adequada à finalidade.
As balanças XPR incorporam funções de garantia de qualidade para que você possa ter certeza de que a balança está nivelada e que os testes de rotina estão atualizados antes de começar a pesar. O status da balança é indicado pela StatusLight™ embutida na frente do terminal da balança. De relance, você pode ver que verde significa que é seguro pesar, amarelo é um aviso e os erros são mostrados em vermelho.
A biblioteca de testes de rotina integrada contém modelos personalizáveis para testes de excentricidade, repetibilidade e sensibilidade. Um registro de todos os testes de rotina é mantido para fornecer rastreabilidade.
O software de laboratório LabX fornece suporte máximo para conformidade. Ao implementar seus SOPs no LabX, você pode ter certeza de que todos os usuários seguem os mesmos procedimentos de preparação de meios de cultura. O software também pode gerenciar todas as funções de garantia de qualidade, incluindo o agendamento de testes de rotina e o bloqueio do uso da balança, se necessário. Todos os resultados e informações do processo são salvos com segurança em um banco de dados central para garantir a rastreabilidade e auxiliar na conformidade com a FDA CFR parte 11.
Quando uma balança não se estabiliza, há uma grande chance de que a célula de pesagem esteja sendo influenciada por cargas eletrostáticas ou correntes de ar.
Cargas eletrostáticas podem se acumular em recipientes e amostras durante o manuseio normal, para que você não esteja fazendo nada de errado. Às vezes, a balança é capaz de assentar, mas o valor do peso exibido na balança pode não ser a quantidade real da substância adicionada, o que pode explicar por que a reprodutibilidade é baixa. Para remover cargas eletrostáticas de seus recipientes e amostras, ionizadores independentes podem ser colocados ao lado de sua balança.
Problemas de resolução também podem surgir do uso de uma cabine de segurança ou capela de exaustão.
Nesses ambientes, correntes de ar de fluxo turbulento ou laminar podem aplicar uma força na célula de pesagem, impedindo que a balança se estabilize e afetando a repetibilidade.
O prato de pesagem SmartPan nas balanças de precisão XPR minimiza os efeitos das correntes de ar na célula de pesagem. O SmartPan oferece maior estabilidade do que um prato de pesagem padrão, permitindo que os resultados sejam entregues até duas vezes mais rápido e melhorando a repetibilidade.
As balanças XPR incorporam funções para configurar etiquetas de amostra com todas as informações necessárias, incluindo o cálculo automático da data de validade. Até códigos de barras podem ser adicionados. O rótulo pode ser impresso automaticamente no final do procedimento de preparação do meio de cultura. As etiquetas da METTLER TOLEDO suportam as temperaturas dos processos de esterilização em autoclave.
Uma boa ideia é incluir etiquetas de código de barras em seus ingredientes para identificar exclusivamente cada amostra. As balanças XPR suportam leitores de código de barras; O código de barras do ingrediente é escaneado antes de adicioná-lo à mistura de meios de cultura, para que seja fácil verificar se você tem o ingrediente certo. Ao conectar sua balança XPR ao LabX, um aviso será dado se você digitalizar o mesmo código de barras novamente, portanto, não é possível adicionar o mesmo ingrediente duas vezes.
O software de laboratório LabX é facilmente integrado ao seu LIMS para permitir a transferência bidirecional de informações entre o seu LIMS e os instrumentos conectados ao LabX, incluindo qualquer balança usada para a preparação do meio de cultura.
