Verbeter uw data met Good Pipetting Practice

Vloeistoffen met een hoge dampdruk kunnen snelle concentratieverschuivingen veroorzaken als ze te lang aan de lucht worden blootgesteld. Maak de pipetpunt voordat je begint vochtig, werk snel en houd containers waar mogelijk afgedekt. Een consistente aspiratietechniek, inclusief de optie van omgekeerd pipetteren, kan helpen bij het stabiliseren van volumes.

Omdat positive displacement pipetten geen luchtspleet hebben, zijn ze nauwkeuriger bij vloeistoffen met een hoge dampdruk. Ze worden dus aanbevolen als nauwkeurigheid van vitaal belang is voor de toepassing. 

Bij het kiezen van de juiste pipet moet u uw vereisten evalueren. Ten eerste, wat voor soort monsters pipetteert u? Zijn ze waterig? Of zijn ze stroperig, vluchtig, schuimend, bijtend of gevaarlijk? Voor waterige en bijna-waterige vloeistoffen zijn air displacement pipetten een goede keuze. Voor viskeuze, vluchtige en andere ongebruikelijke vloeistofsoorten is een positive displacement pipet een betere keuze voor zowel nauwkeurigheid als veiligheid. 

Welk volume gaat u pipetteren? Hoeveel monsters moet u van het ene vat naar het andere overbrengen? Bekijk deze whitepaper over pipetselectie om te begrijpen welke pipet het beste werkt, afhankelijk van de vloeistof en andere factoren die uniek zijn voor uw situatie.

Microfluïdische testen vereisen compromisloze nauwkeurigheid. Stabiliseer uw pipetteerhand, gebruik pipetpunten van hoge kwaliteit die zijn ontworpen voor ultralage volumes en overweeg omgekeerd pipetteren voor een betere consistentie. Regelmatige kalibratie, samen met het beheersen van omgevingsfactoren zoals temperatuur, ondersteunt de nauwkeurigheid op deze schalen. 

De pipetten van Rainin, in combinatie met nauwkeurig ontworpen pipetpunten voor microvolumes, bieden de nauwkeurige en betrouwbare controle die u nodig hebt om uitstekende resultaten te behalen in geavanceerde microfluïdische experimenten.

Bij het pipetteren van dikke oplossingen met een multichannel pipet veroorzaken luchtbellen volumefouten en bemoeilijken ze metingen. Om het risico op luchtbellen te verminderen, maakt u de pipetpunten nat door 2 tot 3 keer langzaam op te zuigen en te doseren. Zuig vervolgens langzaam aan en zorg ervoor dat de uiteinden tijdens het aanzuigen volledig zijn ondergedompeld om de kans op luchtbellen te verkleinen. Omgekeerd pipetteren kan extra controle bieden bij monsters die gevoelig zijn voor bellen. 

Omdat positive displacement pipetten geen luchtspleet hebben, hebben luchtbellen minder invloed op de nauwkeurigheid. Bij het pipetteren van veel aliquots van vloeistoffen die luchtbellen vormen, helpt een elektronische repeaterpipet, zoals Nanorep, problemen te voorkomen. Handmatige positive replacement pipetten zijn ook nuttig bij experimenten met een lagere doorvoer waarbij nauwkeurigheid belangrijk is.

Houd tijdens het aanzuigen een pipet zo verticaal mogelijk en vermijd elke hoek groter dan 20° ten opzichte van de Y-as. Als u tijdens het doseren de wand van het doelvat aanraakt om alle vloeistof volledig uit de pipetpunt te trekken, is het OK om de hoek van 20° te overschrijden.

Voorwaarts pipetteren is de standaard pipetteertechniek en de beste keuze voor waterige monsters. Voor viskeuze en vluchtige monsters levert omgekeerd pipetteren een betere nauwkeurigheid.

Om de pipet vooruit te duwen, duwt u de zuiger naar beneden tot de eerste aanslag terwijl u de pipet buiten de vloeistof houdt. Dompel de punt vervolgens 2-10 mm diep onder in de vloeistof waarmee u werkt, niet dieper. Laat de zuiger langzaam los tot hij volledig is uitgerekt om het volledige vloeistofvolume op te zuigen. Om in uw doelvat te doseren, beweegt u de pipet in het vat en drukt u vervolgens de zuiger met een gelijkmatige snelheid door de eerste stop helemaal naar de tweede stop, voor zover de zuiger gaat. Terwijl de zuiger volledig is ingedrukt, sleept u de pipetpunt lichtjes langs de wand van het vat. Dit helpt om het volledige vloeistofvolume volledig af te geven. Laat de zuiger los, werp de pipetpunt uit, laad een nieuwe pipetpunt en herhaal.

Om de pipet om te keren, duwt u de zuiger helemaal naar beneden door de eerste stop naar de tweede stop, zo ver als de zuiger gaat. Dompel vervolgens de pipetpunt onder in vloeistof en laat de zuiger langzaam en gelijkmatig los om aan te zuigen. Ga naar het ontvangende vat en druk op de zuiger ALLEEN TOT DE EERSTE STOP om het juiste volume af te geven. Er blijft een klein restvolume achter in de pipetpunt. Beweeg de pipet over een weggooivat en druk de zuiger de rest van de weg naar beneden tot aan de tweede stop, ook wel de "blowout"-stop genoemd, om de resterende vloeistof te laten ontsnappen. 

Laat de zuiger los, werp de pipetpunt af, laad een nieuwe pipetpunt en herhaal.

Op zoek naar meer tips over pipetteertechnieken? Dowload vandaag nog deze handige poster voor uw laboratorium! 

Een air displacement pipet kan worden gebruikt om licht viskeuze vloeistoffen, waaronder bloed, te pipetteren. Gebruik de hierboven beschreven omgekeerde pipetteertechniek om maximale nauwkeurigheid te bereiken. Voor meer viskeuze vloeistoffen, zoals 85% glycerol of Triton X-100, biedt een positive displacement pipet de beste nauwkeurigheid en consistentie.

Licht vluchtige vloeistoffen, zoals ethanol, kunnen worden gepipetteerd met een air displacement pipet met behulp van de bovengenoemde omgekeerde pipetteertechniek. Positive displacement pipetten zijn echter een betere keuze voor vluchtige vloeistoffen. 

Als u een air displacement pipet gebruikt, spoelt u de pipetpunt dan ten minste vijf keer voor (aanzuigen en doseren) voordat u uw volume pipetteert. Dit brengt de lucht in de pipet in evenwicht, waardoor de verdampingssnelheid van de vloeistof wordt vertraagd. Snelle verdamping van vluchtige vloeistoffen zet de lucht in een pipet uit en dwingt vloeistof uit de pipetpunt zonder dat er druk op de zuiger wordt uitgeoefend, en dit vermindert een nauwkeurige volumeafgifte.

Vluchtige vloeistoffen, zoals acetonitril, kunnen over het algemeen beter worden gehanteerd met een positive displacement pipet.

Ja, pipetteren met air disp[lacement pipetten kan aerosolen veroorzaken. Aerosolen kunnen in het inwendige van de pipet opstijgen en de binnenwanden en zuiger verontreinigen. Aerosolisatie treedt gemakkelijker op wanneer de zuiger te snel wordt losgelaten tijdens het opzuigen en kan ook in de tegenovergestelde richting buiten de pipet optreden bij een te snelle dosering. 

Om aerosolen tot een minimum te beperken, aspireert en doseert u langzaam en gelijkmatig. Gebruik gefilterde pipetpunten. 

Positive displacement pipetten maken gebruik van spuitnaaldachtige pipetpunten die verneveling voorkomen. Een positive displacement pipet is de beste keuze voor het pipetteren van gevaarlijke vloeistoffen en elke vloeistof met een verhoogde viscositeit of vluchtigheid.

Zeer koude of hete vloeistoffen veranderen de luchtdruk in air displacement pipetten, wat leidt tot onnauwkeurig pipetteren. 

Positive displacement pipetten, met spuitnaaldachtige pipetpunten, die geen luchtzak hebben tussen vloeistof en zuiger, worden niet beïnvloed door verschillende temperaturen van vloeistoffen. Positive displacement pipetten leveren nauwkeurige resultaten met vloeistoffen die niet op kamertemperatuur zijn.

Als u een zeer hete of koude vloeistof moet pipetteren met een air displacement pipet, spoel de pipetpunt dan niet voor. Zuig in plaats daarvan snel aan en doseer om het effect van de vloeistoftemperatuur op de binnenluchtspleet van de pipet te minimaliseren.

Om luchtbellen en schuimvorming tijdens het pipetteren te voorkomen, mag u de pipetpunt niet verder dan 10 mm in het vloeistofreservoir dompelen en langzaam aanzuigen.

Omgekeerd pipetteren biedt extra bescherming omdat u voor het aanzuigen de zuiger volledig tot aan de 2e stop drukt, zodat er geen kans is dat er lucht in het vloeistofmonster wordt geïnjecteerd. Ga voor meer informatie over omgekeerd pipetteren naar deze pagina. 

Een positive displacement pipet veroorzaakt geen luchtbellen of schuim bij interactie met vloeistof, omdat de spuitnaaldvormige pipetpunt geen lucht bevat waarmee de vloeistof kan interageren.

Ontsmet een pipet door deze af te vegen met een natte doek en een reinigingsmiddel, zoals isopropanol of een oplossing van 10% bleekmiddel. Vermijd het doorzichtige plastic venster van de micrometer.

Autoclaveren kan een andere optie zijn, maar controleer de instrumentspecificaties van uw pipet. Als het autoclaveerbaar is, is dan het hele instrument geautoclaveerd of alleen het vloeibare uiteinde?  Vaak kan alleen het vloeibare uiteinde worden geautoclaveerd.

Voor meer informatie over het schoonmaken van een pipet, download de poster Een pipet schoonmaken.

Reactieve chemicaliën moeten met zorg worden behandeld. Gebruik verse, inerte pipetpunten en spuit de buitenkant van de pipet regelmatig in met ethanol om spatten en resten te verwijderen. Voorkom contact tussen de pipetpunt en oppervlakken en verwissel pipetpunten regelmatig om kruisbesmetting te voorkomen.

De pipetten van Rainin staan alom bekend om hun veilige aangrijping van de pipetpunt en de soepele bediening van de plunjer en ondersteunen veilige, contaminatievrije overdrachten, zelfs bij het werken met uitdagende, reactieve reagentia.

De nauwkeurigheid van de pipet  is het verschil tussen het gemiddelde volume van alle metingen (4-10 metingen) en het ingestelde volume. Bij het bespreken van de precisie van een pipet wordt dit uitgelegd als de standaarddeviatie van alle uitgevoerde metingen. 

De onzekerheid van een pipet is de kwantitatieve term voor de algehele nauwkeurigheid. Het is een combinatie van juistheid (een maat voor systematische fouten) en precisie (een maat voor willekeurige fouten). 

De vergelijking voor onzekerheid is: 

Onzekerheid = Systematische Fout + Willekeurige Fout * k. k (dekkingsfactor of Z-score) is afhankelijk van het aantal metingen. k=3,31 voor vier metingen en 2 voor tien metingen.

Download deze whitepaper voor meer informatie over de onzekerheid van pipetten en het waarborgen van nauwkeurigheid.